细胞传代培养
操作步骤
1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，细胞培养，使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，293t细胞，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止---。观察---也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止---。一般室温---时间约为1- -3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37°c下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
附:---液配制方法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)， 加入100ml无ca2+、mg2+的hanks液溶解，滤器过滤chu菌，4°c保存，用前可在379c下回温。胰酶溶液中也可加入edta，使zui终浓度达0.02%。
选择实验外包公司需要注意哪些事项？
1. 实地考察
可以到公司实地考察一下实验室，看一下实验室环境、设备仪器情况，是否能满足实验方案所需条件。能整体承接课题，动物细胞。一些大型仪器公司不一定有，看有没有高校平台资源渠道共享。---是真实进行实验的，这样后续实验结果数据也比较---。
2. 方案评估
实验合作前期一般会进行所需实验内容的评估，来确定终实际实验方案和报价。方案评估可以看出外包团队的性。一个---的外包公司会对方案提出针对性的建议，评估各项实验是否能做，以及根据预算情况和实际操作对细节适当地调整。任何实验都是有不确定性的，但是前期敲定好方案能为后续实际开展实验打下---基础，也会省去许多---和麻烦。
细胞实验介绍——流式细胞术检测细胞周期和凋亡
流式细胞术检测细胞周期：
细胞周期：指细胞从---次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由g0/g1期、s期、g2期和m期组成。g0/g1期：有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，进入下一个细胞周期，达州细胞，或者进入静止期（g0期），而g0期从dna含量上无法与g1期区分，细胞开始rna和蛋白质的合成，但dna含量仍保持二倍体。s期：dna开始合成，细胞实验，细胞核内dna的含量介于g1期和g2期之间。g2期和m期：当dna成为4倍体时，细胞进入g2期。g2期细胞继续合成rna及蛋白质，直到进入m期。
pi法是---的周期检测方法。pi为插入性---荧光染料，能选择性的嵌入---dna和rna双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与dna的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的dna分布状态，从而计算出各个期的百分含量。
一般流程：细胞收集-70%酒精固定过夜-pi染色-流式细胞仪检测。
细胞凋亡：细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生。破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(ps)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在之前，检测ps的表达，能反映早期凋亡。annexinv是ca2+依赖的磷脂结合蛋白，对ps有---的亲和性，并且可以与暴露于细胞外的ps相结合。利用这一原理，可以将annexinv标记荧光来识别早期的细胞凋亡。通常利用annexinv-fitc和碘化丙啶(pi)来区分凋亡和坏---。pi的膜通透性很差，因而只能标记坏死的细胞。
一般流程：细胞收集-pi-annexinv标记-流式细胞仪检测。
结果示例：
图 a 细胞周期检测图；b 细胞凋亡检测图
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