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3.引物的od数如何定量?

答:引物合成引物od数是这样测定的:用紫外分光光度计,波长260nm,石英比色杯,光程为1厘米,测定溶液的光密度。测定时溶液的光密度好稀释到0.2-1.0之间。dna干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后,pcr,用1ml水稀释测od值。需要根据稀释倍数换算出母液的od值。

4.需要什么级别的引物?

答:引物常用的纯化方式脱盐、biorp / opc纯化、page纯化、hplc纯化。根据实验需要,确定订购引物的纯度级别。


elisa 是一种结合抗原、抗ti特---反应和酶对底物高xiao催化作用的高敏感性免yi学实验技术。elisa 的基础是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗ti仍保持其免yi学活性,酶标记的抗原或抗ti既保留其免yi学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗ti或抗原)与固相载体表面的抗原或抗ti起反应,pcr,洗涤使固相载体上形成的抗原抗ti复合物与液体中的其他物质分开,实时定量pcr,再加入酶标记的抗原或抗ti,通过反应使其结合在固相载体上。此时固相上的酶含量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。




蛋白提取

大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液, 少数与脂类结合的蛋白质则溶于---、---等有ji溶剂中,因些,---,可 采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。

(一)水溶液提取法

稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度---于溶 解,缩短提取时间。但另一方面. ,温度升高会使蛋白---性失活,因此,基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温( 5度以下)操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解,可加入蛋白 水解酶抑zhi剂(如二yi------,碘yi酸等)。





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