磁性细胞标记方式
应用macs技术进行磁性细胞分选重要的一点是高的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记,并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式:直接标记和间接标记。
1、直接磁性细胞标记(direct ---ic cell labeling)
(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是快速、zui特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的macs直标微珠可供选用。
2、间接磁性细胞标记(indirect ---ic cell labeling )
(磁珠结合不需要的细胞,细胞实验外包,游离于磁场的细胞为所需细胞)间接磁性细胞标记需要联合使用单ke隆或者多ke隆抗ti和macs间标微珠。未结合抗ti、生物素化抗ti或者荧光素标记抗ti均可作为一抗标记细胞,再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗,均可用于间接标记。间接标记主要在如下情况时选用:当没有直标磁珠时;需要用几种抗ti的混合物同时分选或去除多种类型的细胞;间接标记有放大作用,因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用;使用自备或者配体的磁珠分选中。( -般而言,阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大,阳性分离法用行更多。)
小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立
细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破 骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,trap染色鉴定和骨吸收功能检测,并进一 步采用rt- pcr对破骨细胞标志酶基因基质金属蛋白酶.9(mmp-9)、trap 和组织蛋白酶k (cathepsin k )的表达进行检测结果共培养5天后---trap(+)多核细胞形成13天trap(+ )多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,细胞实验外包费用,随着培养时间的延长,陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志基因trap在共培养3天时开始表达,细胞实验,而mmp-9和cathepsin k则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用------的破骨细胞具有噬骨能力,该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.
细胞实验部分设备图片
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