流式细胞实验-英瀚斯-台州细胞

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    2023-8-20

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yao物对细胞的ic50检测  

     ic50 (half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮抗剂的半抑制浓度。它能指示某一yao物或者物质(yi制剂)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质,比如酶,细胞受体或是微生物)的半量。在凋亡方面,可以理解为一定浓度的某种药wu---肿liu细胞凋亡50%,该浓度称为50%抑制浓度,即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度,ic50值可以用来衡量yao物---凋亡的能力,即---能力越强,该数值越低,当然也可以反向说明某种细胞对yao物的耐受程度。





细胞培养中常见的污染及解决方法


支原体污染

支原体是隐蔽的污染物,不能通过过滤去除。显微镜下没有任何可见的支原体污染迹象,比如细胞病变和浊度或 ph 值变化(即使在---污染的培养基中),流式细胞实验,这样就会导致我们产生错误的---。而在牛中,支原体是常见的微生物之一。

解决方法:通常的过滤灭菌方法对支原体没有影响。细胞一旦被支原体污染,---是对重要的细胞系,必须去除支原体,一般的方法有、抗和抗与补体联合。值得注意的是,支原体很---的结构特征是没有细胞壁。因此,它对作用于细胞壁的生物合成(如 β-内---类、万古等)完全不敏感,并且通常对多粘菌素、---和类具有耐药性。相反,流式细胞技术,四环素类和大环内酯类对支原体的抑制作用很强,而---糖苷类和氯的抑制作用较弱。






软gu细胞培养

(1)---脱颈处死,备皮,用75%酒精消毒背部及四肢皮肤。

(2)无菌操作下取下双侧股骨头及膝关节(保留周围肌肉,软gu不能暴露),75%酒精浸泡5分钟,转移至pbs缓冲液中,带入超净工作台,细胞生物学实验,剔除关节周围附着的软组织,打开髋、膝关节,用尖刀削取关节软gu组织,置入装有pbs缓冲液的无菌培养皿,防止软gu组织被风干。

(3)pbs缓冲液充分漂洗软gu小块3次,然后用小剪刀将软gu块切碎至约imm3大小。

(4)再次用pbs缓冲液冲洗3次,滤干,将细小的软gu块置入放有0.2%的ii型胶原酶3ml的广口瓶里,摇匀后置于37°c恒温震荡箱中---,台州细胞,40分钟后将上层---液转移至15ml规格离心管中,800r/min离心5min,收集细胞(沉淀物),加入含10%的胎牛xue清dmem培养液4ml并吹打混匀,制成软gu细胞混悬液。

(5)把---所得的软gu细胞混悬液收集于离心管中,经滤网过滤后用细胞计数板计数,并把细胞混悬液密度调整为2x105/ml接种于25cm2规格的培养瓶中。将培养瓶放置于co2培养箱内。培养条件为37°c、5%co2。

(6)未---完的软gu小块继续用ii型胶原酶如_上法---,直至软gu块基本消失。

(7)每日在倒置显微镜下观察软gu细胞生长情况并拍照保存。





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