----英瀚斯-铜川细胞

细胞实验介绍——流式细胞术检测细胞周期和凋亡

流式细胞术检测细胞周期：

细胞周期：指细胞从---次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，细胞实验外包，通常由g0/g1期、s期、g2期和m期组成。g0/g1期：有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，进入下一个细胞周期，或者进入静止期（g0期），而g0期从dna含量上无法与g1期区分，细胞开始rna和蛋白质的合成，流式细胞实验，但dna含量仍保持二倍体。s期：dna开始合成，细胞核内dna的含量介于g1期和g2期之间。g2期和m期：当dna成为4倍体时，细胞进入g2期。g2期细胞继续合成rna及蛋白质，直到进入m期。

pi法是---的周期检测方法。pi为插入性---荧光染料，能选择性的嵌入---dna和rna双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与dna的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的dna分布状态，从而计算出各个期的百分含量。

一般流程：细胞收集-70%酒精固定过夜-pi染色-流式细胞仪检测。

细胞凋亡：细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生。破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(ps)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在之前，检测ps的表达，---，能反映早期凋亡。annexinv是ca2+依赖的磷脂结合蛋白，对ps有---的亲和性，并且可以与暴露于细胞外的ps相结合。利用这一原理，可以将annexinv标记荧光来识别早期的细胞凋亡。通常利用annexinv-fitc和碘化丙啶(pi)来区分凋亡和坏---。pi的膜通透性很差，因而只能标记坏死的细胞。

一般流程：细胞收集-pi-annexinv标记-流式细胞仪检测。

结果示例：

                                   图 a 细胞周期检测图；b 细胞凋亡检测图

mtt检测

mtt 是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活xi胞线粒体中的---脱氢酶能使外源性 mtt 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（formazan）并沉积在细胞中，铜川细胞，而---无此功能。二jia基---（dmso）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免yi检测仪在 570nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活xi胞数量。