细胞传代培养
操作步骤
1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，细胞实验室，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，细胞，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止---。观察---也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止---。一般室温---时间约为1- -3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，流式细胞检测结果分析，置37°c下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
附:---液配制方法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)，转染， 加入100ml无ca2+、mg2+的hanks液溶解，滤器过滤chu菌，4°c保存，用前可在379c下回温。胰酶溶液中也可加入edta，使zui终浓度达0.02%。
小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立
细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞，采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破 骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase，trap染色鉴定和骨吸收功能检测，并进一 步采用rt- pcr对破骨细胞标志酶基因基质金属蛋白酶.9(mmp-9)、trap 和组织蛋白酶k (cathepsin k )的表达进行检测结果共培养5天后---trap(+)多核细胞形成13天trap(+ )多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现，随着培养时间的延长，陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志基因trap在共培养3天时开始表达，而mmp-9和cathepsin k则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用------的破骨细胞具有噬骨能力，该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.
大鼠主动脉内皮细胞的分离培养
方法：分离大鼠主动脉，直接贴壁于培养皿中，荧光倒置显微镜观察细胞形态，免yi组化ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞.结果:约24小时组织块边缘有游离的 新生细胞长出，7天即融合成片.---传代后细胞呈短梭形或三角形，单层生长，铺路石状，ⅷ因子表达阳性，呈指数增殖.冻存后复苏细胞活性均超过90%.结 论:用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法，冻存细胞存活率高，为体外研究提供了稳定的模型.
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