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    2023-9-9

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2.2旋转圆筒睡眠剥夺法

此方法于 1979 年先应用于睡眠剥夺实验中,设备主要由一柱形圆筒及一小型慢速马达构成。圆筒直径 30 cm,高 30 cm 。圆筒底由 pvc (聚)构成,侧壁由直径为 10.4 m m 的 pvc 杆围成。杆长度 30 cm,杆之间间隔 15.5 m m,南充动物模型,圆筒与小型马达相连。马达转速为每 45 s转 1 圈(也有学者应用每 m in 转 1 圈)。至少在实验前 2 d每天将大鼠放入圆筒中适应环境 1 次,适应时间不少于 3 h。实验时将马达按 45 s每1 圈进行匀速转动,通过圆筒的转动带动大鼠---运动而达到睡眠剥夺的目的。此类方法简单易行,睡眠剥夺效果明显。缺点是长时间---运动可引起机体的运动后应激反应及---劳,可能干扰睡眠剥夺实验结果! 此类方法发展出多种变化,有实验者在进行新生大鼠睡眠剥夺时将筒旋转速调节至 2~3 r/m in后期逐渐增加至 6~7 r/m in。






简单介绍agomir
agomir的使用需要注意以下几点:?  agomir的设计需要参考mirbase数据库中的微rna序列,基因敲除,选择合适的靶基因和靶组织。?  agomir的剂量和给yao方式需要根据实验目的和动物模型进行优化,一般建议从低剂量开始逐步增加,观察效果和副作用。?  agomir的效果持续时间一般为1周以上,甚至可达5-6周,实验动物模型公司,因此需要合理安排实验时间点和取样方式。?  agomir的使用需要配合相应的负对照(negative control),即没有靶基因结合位点的随机序列修饰物,以排除非特---效应。?  agomir的使用需要结合其他方法进行验证,如rt-qpcr、western blot、免mian疫组化等,动物实验外包,以评估微rna和靶基因表达水平的变化。


什么是sirna ?

小干扰 rna (sirna) 是由 20-25 个核苷酸组成的双链 rna 分子,在细胞中具有多种功能。在 rna 干扰 (rnai) 通路中,sirna 通过与互补 mrna 分子杂交干扰基因表达。这种干扰会触发 mrna 降解,进而抑制特定基因的基因表达。

sirna 于 1999 年由 david baulcomb 实验室shou次发现。2001 年,thomas tuschl 提出合成 sirna 会在哺乳动物细胞中--- rna 干扰 (rnai)。如今,专门设计用于与 rna 靶序列杂交并使其降解的“合成”sirna 寡核苷酸已被广泛用于---细胞 rnai。靶 mrna 的降解能够有效“敲除”相应蛋白质的表达。然后可研究分析靶蛋白浓度降低造成的影响。


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