脑组织组化实验
1. 灌注固定用的针头,一般都用注she针头。灌注大鼠一般可用 10 到 12 号针头,小鼠可用 6、7 号针头,但很重要的一点是要把针头的磨钝而不是用锐利的针头。
2. 关于穿刺:灌注大鼠时要把穿刺针的插入到升主动脉内,但不宜进入升主动脉过长,攀枝花动物模型,在动脉内见到针头或插入约 1mm 左右即可;灌注小鼠时只要把针头插入左心室内即可,不---插入到升主动脉内。操作的要点是:,操作要迅速,剪开膈肌后,迅速沿腋前线剪开胸壁,并把胸前壁往上翻,暴露---;第二,一定要在明视野下操作,要剪开心包壁层的前壁,暴露升主动脉和肺动脉干的根部,---穿剌针能进入升主动脉;第三,穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定---,动物实验室,但不要夹得过紧,要让心腔内留有一定的间隙,然后在心尖处轻轻旋转针头插入穿刺针。也可以用小剪刀在心尖处先剪开一个小口再插入穿刺针;第四,穿刺方向要正确,从心尖部开始,从左下方斜向右上方,若遇阻力要改变方向再试,不要用力蛮插。
3. 灌注用生理盐水的量大鼠用 50ml 左右,动物行为学,小鼠用 10ml 左右,一般以从右心耳流出的液体清亮为标准;4% ---用量约相当于老鼠体重,如 300 克的老鼠用 300ml 左右。小鼠一般用 20-30ml。灌注速度先快后慢,可持续 1-2 个钟头,动物模型实验外包,也可以稍快。取脑后置脑块于 4% ---内 4 度后固定 4-6 个钟头。
三、实验指标区域指标开臂1停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度(x轴投影速度)开臂2停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度(x轴投影速度)开臂3停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度(x轴投影速度)其他臂停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度(x轴投影速度)四、实验方法及应用
1) 动物适应实验环境1周后,称重,禁食24小时。此后每天训练结束后---性地给予正常食料(据体重不同,大鼠16-20g,小鼠2-3g),以使体重保持在正常进食大鼠的80%~85%。
2) 第二天,迷宫各臂及中央区分撒着食物颗粒(每只4~5粒,直径约3~4mm)。然后,同时将4只动物置于迷宫中央(通往各臂的门打开)。让其自由摄食、探究10min。
3) 第三天,重复第二天的训练。这一过程让动物在没有很强的应激条件下熟悉迷宫环境。
4) 第四天起,动物单个进行训练:在每个臂靠近外端食盒处各放一颗食粒,让动物自由摄食。食粒吃完或10min后将动物取出。
5) 第五天,将食物放在食盒内,重复前---的训练,---2次。
6) 第六天以后,随机选4个臂,每个臂放一颗食粒;各臂门关闭,将动物放在迷宫中央;30s后,臂门打开,让动物在迷宫中自由活动并摄取食粒,直到动物吃完所有4个臂的食粒。如经10min食粒仍未吃完,则实验终止。每天训练两次,其间间隔1h以上。
2.2旋转圆筒睡眠剥夺法
此方法于 1979 年先应用于睡眠剥夺实验中,设备主要由一柱形圆筒及一小型慢速马达构成。圆筒直径 30 cm,高 30 cm 。圆筒底由 pvc (聚)构成,侧壁由直径为 10.4 m m 的 pvc 杆围成。杆长度 30 cm,杆之间间隔 15.5 m m,圆筒与小型马达相连。马达转速为每 45 s转 1 圈(也有学者应用每 m in 转 1 圈)。至少在实验前 2 d每天将大鼠放入圆筒中适应环境 1 次,适应时间不少于 3 h。实验时将马达按 45 s每1 圈进行匀速转动,通过圆筒的转动带动大鼠---运动而达到睡眠剥夺的目的。此类方法简单易行,睡眠剥夺效果明显。缺点是长时间---运动可引起机体的运动后应激反应及---劳,可能干扰睡眠剥夺实验结果! 此类方法发展出多种变化,有实验者在进行新生大鼠睡眠剥夺时将筒旋转速调节至 2~3 r/m in后期逐渐增加至 6~7 r/m in。
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