免yi共沉淀(co-ip检测)是以抗ti和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的方法。当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质与蛋白质间的相互作用也被保留下来。用预先固化在beads上的蛋白质a的抗ti免yi沉淀a蛋白,pcr,那么与a蛋白在体内结合的蛋白质b也能一起沉淀下来,---,再通过蛋白变性分离,对b蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。
通常活性氧阳性对照在---细胞20-30分钟后可以---提高活性氧水平。
收集细胞后装载探针:按照1:1000用无培养液稀释dcfh-da,pcr引物设计,使终浓度为10微摩尔/升。细胞收集后悬浮于稀释好的dcfh-da中,细胞浓度为一百万至二千万/毫升,37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。用无细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。直接用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞,或把细胞等分成若干份后---细胞。通常活性氧阳性对照在---细胞20-30分钟后可以---提高活性氧水平。
2.、检测
对于原位装载探针的样品可以用激光共---显微镜直接观察,或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光或流式细胞仪检测。
对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光或流式细胞仪检测,用激光共---显微镜直接观察也可以。
腺---包装原理介绍
腺---是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒,由252个 壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。衣壳里是线状双链dna分子,两端各有长约100bp的反向重复序列。人体腺--- 已知有33种,荧光定量pcr,分别命名为ad1-ad33,研究详细得是ad2.
腺---是一种无包膜的球型结构的---,遗传物质为线型 双股dna形式。腺---的特点:(1)gan染范围广对人致病性低;(2)对增殖和非增殖细胞均具有gan染性;(3)能有效进行增殖;( 4)---滴度高;(5)不整合到染色体中,无插入致突变性;(6)外源基因装载容量大。由于腺---的这些特点使其广泛地应用于体 外基因转导、体内接种yi苗、和基因zhi疗等各个领域。
实验方法
1.获得目的基因序列;
2.构建---表达载体质粒;
3.表达载体质粒和包装质粒重组;
4.gan染hek293,包装出---;
5.---扩增、浓缩;
6.滴度测定。
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