染色质免l疫共沉淀技术(chip)
基于体内分析而发展的染色质免l疫沉淀分析chr omat in immunoprecipitat ionassay kit, chip)
染色质免l疫沉淀分析(chip) 的基本原理是在活l细胞状态下,当用甲醛处理时,相互靠近的蛋白
13.合成的引物5端是否有磷酸化
答:合成的引物5为---,实时荧光定量pcr,没有磷酸基团。如果需要您可以用多核苷酸激酶进行5′端磷酸化,南充pcr,或者要求引物合成公司合成时直接在5′或3′端进行磷酸化,需要另外收费。
14.引物片段退火后不能连接到载体上是什么问题?
连接反应需要引物的5’磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上,引物需要磷酸化。磷酸化的产物如果还不能连接载体上,需要检查载体的酶切效果,荧光定量pcr,需要---引物退火的条件。sirna分子具有特殊的对称结构,退火的难度较大,退火时需要提高退火温度。
20.primer设计的基本原则是什么?
答:引物设计的下列原则供您参考。
◆引物长度一般在18-35mer。
◆g-c含量控制在40-60%左右。
◆避免近3端有酶切位点或发夹结构。
◆如果可能避免在3端5个碱基有2个以上的g或c。
◆如果可能避免在3端1个碱基为a。
◆避免连续相同碱基的出现,---是要避免gggg或更多g出现。
◆退火温度tm控制在 58-60c 左右。
◆如果是设计点突变引物,突变点应尽可能在引物的中间。
21.为什么引物的od260/od280小于1.5 ?
答:引物应该全是dna,pcr检测,但是od260/od280的比值为什么那么低,怎么会有蛋白质污染?引物化学合成,哪里有机会污染到蛋白质?需要---的是od260/od280的比值不能用来衡量引物的纯度。od260/od280的比值过低一般是由于引物中c/t 的含量比较高所致。下表是一个20mer 同聚体引物的od260/od280的比值,清楚表明od260/od280的比值与引物的碱基组成密切相关。
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