细胞传代培养
操作步骤
1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，细胞实验外包，在还未漂起时将胰酶弃去，细胞实验，加入10m培养液终止---。观察---也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止---。一般室温---时间约为1- -3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37°c下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
附:---液配制方法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)， 加入100ml无ca2+、mg2+的hanks液溶解，滤器过滤chu菌，4°c保存，用前可在379c下回温。胰酶溶液中也可加入edta，细胞实验外包选，使zui终浓度达0.02%。
关于细胞冻存的注意事项：
1. 为保持细胞大存活率，一般都采用慢冻存融的方法。
2. 冻存物距液氮面越近温度越低。标准的低冻速度为－1℃~12℃/ 分钟，当温度下降达－25℃时，下降速度可增至－5~－10℃/ 分钟，到－100℃时则可迅速冻入液氮中。因此要适当掌握冻存物下降入液氮中的速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促冰晶形成。
3. 初次冻存者在下降冻存时，宜先用细木棒伸入罐中探测液面位置，然后需用温度计与冻存物并行的办法，细胞实验外包，以观测下降冻存物的速度、冻存物与液氮液面距离和温度三者关系，当已掌握以上各参数和冻存技术熟练后，仅按下降时间和下降距离便可获理想冻存效果。
mtt检测
mtt 是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活xi胞线粒体中的---脱氢酶能使外源性 mtt 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（formazan）并沉积在细胞中，而---无此功能。二jia基---（dmso）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免yi检测仪在 570nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活xi胞数量。
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