




流式细胞分选
流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的--种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单ke隆分选,能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行速分选纯化、高通量单分选或细胞芯片制备。分选后的细胞能直接用于培养、移植、---提取、单细胞pcr扩增或原位杂交等,可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。硬件中样本细胞丢弃的比例低于5%,---样本中目标细胞的高回收率。
大鼠主动脉内皮细胞的分离培养
方法:分离大鼠主动脉,直接贴壁于培养皿中,荧光倒置显微镜观察细胞形态,免yi组化ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞.结果:约24小时组织块边缘有游离的 新生细胞长出,7天即融合成片.---传代后细胞呈短梭形或三角形,单层生长,铺路石状,ⅷ因子表达阳性,细胞实验外包,呈指数增殖.冻存后复苏细胞活性均超过90%.结 论:用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法,冻存细胞存活率高,细胞实验外包选,为体外研究提供了稳定的模型.
细胞培养中常见的污染及解决方法
霉菌污染
正常情况下,培养基在 37℃ 培养箱中培养两三天,在倒置显微镜下仍保持透明,无杂质。一旦出现絮状杂质,显微镜下可见丝状和团块状漂浮物,菌丝明显。此时,虽然细胞仍在生长,但它们的生命状态会在长时间后逐渐恶化。
解决方法:用---铜溶液擦拭 co2 培养箱,向托盘中加入饱和---铜或消毒后加入饱和磷---二钠高盐溶液,避免霉菌污染。
如果霉菌污染,暂时转移所有细胞,并立即使用 guo 氧擦拭培养箱,细胞实验外包公司,包括层板和内壁。将 guo 氧放在培养箱中一小时,使蒸汽扩散,待 guo 氧气味消散后,将细胞转移到培养箱中。值得注意的是,培养箱需要每两个月定期清洗一次,尤其是在梅雨季节。用 84 消毒液、清水和 75% 酒精连续擦拭培养箱,用紫外线照射也是一种有效的方法。
为防止霉菌污染,需添加 3μg/ml 、抑制素、fang
线菌素 d 或青链。一旦被污染,就不可能恢复,甘肃细胞实验,即使使用上述,也没有什么区别。对于支原体污染的细胞培养,选择是丢弃污染的培养物,并用使用新鲜的无支原体的储存液,消毒环境。如果所有的细胞都被污染了,那可能是整个培养系统污染了。因此,必须对培养基和实验设备进行检查。如果只是个别污染,可能是操作问题,有---注意实验操作步骤的规范。
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