大鼠主动脉内皮细胞的分离培养
方法：分离大鼠主动脉，直接贴壁于培养皿中，荧光倒置显微镜观察细胞形态，免yi组化ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞.结果:约24小时组织块边缘有游离的 新生细胞长出，7天即融合成片.---传代后细胞呈短梭形或三角形，单层生长，铺路石状，ⅷ因子表达阳性，呈指数增殖.冻存后复苏细胞活性均超过90%.结 论:用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法，冻存细胞存活率高，细胞实验，为体外研究提供了稳定的模型.
细胞培养中常见的污染及解决方法
---污染
---污染后，培养基一般清澈，保持原色。细丝可以在显微镜下观察到。，一些---类似于---碎片，但其中许多清晰可见，看起来像珊瑚，比较容易区分。此外，它们会慢慢长出细细的黑色细丝，因为它们生长得比较慢，不像---那样容易被发现，一旦发现培养基被污染，它们将很难存活。
解决方法：一旦被---污染，果断丢弃，然后对细胞房、co2 培养箱、器皿和培养基进行消毒。
平板克l隆形成实验基本步骤::
1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰 蛋白酶---并吹打成单个细胞，---，并把细胞悬浮在10%胎牛的dmem培养液中备用。
2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200 个细胞的梯度密度分别接种含10ml 37预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37团5% co2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。
3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的时，终止培养。弃去上清液，流式细胞实验，用pbs小心浸洗2次。加4%---固定细胞5ml固定15分钟。然后去固定液，加适量gimsa应用染色液染10~30分钟，细胞，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。
4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数，或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的数。后计算形成率。形成率= (数/接种细胞数) x100%平板形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。平板形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞- -定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。
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