自噬流检测
自噬是调节真核细鹏生长、和能量代谢的重要生物学机制。细胞自噬行使其生物学功能的前提是自噬流的话化。大量证据表明自噬流受损与多种慢性炎性---，细胞系，---是、神经退行性---及组织纤维化的发病密切相关，目前对于自噬液的检别是自噬与其相关---研究领域的---。由于自噬流是一个曲多个步骤组成的动态过程。因此往需要精细的突验才能准确判断自啦流状态。
透射电镜自噬小体检测
胰酶---，收集作用后的细胞，离心，先将细胞块固定在2.5%成二醛和0.1%的pbs溶液中保存在4c中过夜。
再用---梯度脱水，接下来用环氧树脂浸透并切成薄片。随后超薄切片用铜网固定，后用重金属---双氧---和柠檬酸铅染色。通过tem分析凋亡细胞内超微结构变化，拍照保存。
贴壁细胞:先倒出培养液，采用胰蛋白酶---或者用细胞刮(会产生碎屑)刮下:带培养液进行离心，100-1500/mim 5 10min。离心完毕倒出培养液。管底的细胞团不要打散， 沿管壁倒入适量(一般为材料体积的5-10倍)的2.5-3.5%成醒固定液，转染，固定约1h-2h. 也可在4c冰箱过夜。
关于细胞培养的常见问题:
q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理？
a: 贴壁细胞在移除原培养液后，用 pbs 冲洗 2-3 遍；悬浮细胞离心移除原培养液后，加入 pbs 重悬，离心移除 pbs; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍，用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。
q：细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗？
a：长期保存的细胞应当放在液氮（-196℃）中保存，短时间（一般 1 周-2 周）可以存放在 -80℃。
q：培养瓶是用密封盖好，还是用透气盖好？
a：都可以。只是在使用密封盖培养瓶时，瓶盖旋至约 2/3，不要完全拧紧，云南细胞，预留约 1/3 以便细胞可以透气；有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。
q:何谓 fbs，fcs，cs，hs?
a: fetal bovine serum(fbs)和 fetal calf serum(fcs)之间没有区别，都是指胎牛；fcs 不是正规命名，尽量不使用。calf serum（cs）则是指小牛。horse serum(hs)则是指马。
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