大鼠脂肪的分离
将手术切取的大鼠脂肪组织尽量剪碎后移至离心管，其余步骤与人脂肪的分离一致。
经手术切除获得的大鼠皮下脂肪组织---后原代培养24 h，且肉眼观察会发现培养瓶底部贴附着一层网状薄膜，轻轻摇晃培养瓶可使这层网状薄膜从瓶壁上脱落，细胞实验外包选，镜下观 察发现大部分细胞都附着于这层膜上，通过术获取的人脂肪组织---后则无此现象。增加胶原酶的量和---时间也无法避免，取材时的或脂肪间结缔组织未被完全---，穿过细胞筛进入了培养瓶并沉淀于瓶底部形成的。胶原蛋白酶虽然可以特---水解胶原蛋白的三维螺旋结构，但不会损伤其他蛋白质。处理方法是37 ℃下用胰蛋白酶 ---5 min。然后利用40 μm的细胞筛过滤后传代。 根据作者的经验，细胞实验外包费用，每毫升手术切除的大鼠脂肪可分离基质血管成分细胞约1.81×106个。原代培养2.24×10^7个大鼠基质血管成分细胞，40 h后传代时约剩余 6.2×10^6个细胞，细胞实验，细胞剩余率27%。
脂质体瞬时转染
1、细胞h9c2 (hela) 6孔板hela1x10°/孔。
2、转染前换上没有抗sheng素的dmem+胎清(10%)。
3、将质粒dna (约2-4ul) 2ul 加入dorf管中+dmem至50u1。
4、脂质体5ul补培养基至50ul混匀静止5分钟(质粒与脂质体比例为1:2或1.5:2.5)。
5、将含有脂质体的培养基与含质粒的混合总体积100ul室温放置30分钟。
6、吸取混合物均匀加入每一个孔中。
7、将6孔板放入培养箱中继续培养6小时后吸出培养基换上新配置的培养基dmem6ml+胎清600u1+三抗300u1。
8、培养24小时。
自噬(autophagy)是细胞受到---后吞噬自身的细胞质或细胞器，终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白---物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、
---和---等。单丹---尸胺(dansylcadaverine，mdc是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被于检测自噬体形成的特---标记染色剂，细胞实验外包，其检测激发滤光片波长355nm ，阻断滤光片波长512nm。leagene mdc染色液适用于培养细胞的自噬染色，可与eb合用双染。
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