分子实验介绍——荧光定量pcr检测
荧光定量pcr是检测生物样品中rna含量的普遍的方法，通过荧光染料或荧光标记的特---的探针，对pcr产物进行标记---，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。目前主要使用sybr green和taqman法对rna含量进行检测。sybr green在低样本量时成本较低，目前选用的较多。
sybr green i是一种只与dna双链结合的荧光染料。当它与dna双链结合时，发出荧光；从dna双链上释放出来时，荧光信号急剧减弱。因此，---，在一个体系内，实时荧光定量pcr，其信号强度代表了双链dna分子的数量。sybr green荧光染料法定量pcr的基本过程是：1、开始反应，当sybr green染料与dna双链结合时发出荧光。2、dna变性时，sybr green染料释放出来，荧光急剧减少。3、在聚合延伸过程中，---多少钱，引物退火并形成pcr产物。4、聚合完成后，sybr green染料与双链产物结合，定量pcr系统检测到荧光的净增量加大。
实验流程：细胞或组织rna提取-rna浓度检测-rna逆转录-定量pcr检测。
结果示例：
图 a 基因扩增曲线图；b 基因扩增溶解曲线图；c mrna相对表达量变化
从图中可以扩增曲线可以看出目的rna扩增效果，溶解曲线可以看出引物识别特---情况，通过使用δδct方法计算可以得到每个组中目的mrna表达变化。
lncrna测序
长链非编码rnas（long non-coding rnas，lncrnas）一般是指长度大于200 nt的rna，位于细胞核内或胞浆中，内蒙古pcr，不参与蛋白质编码功能，以rna形式在多种层面上（表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等）调控基因的表达水平，在生命活动中具有重要作用。
长链非编码rna测序（long non-coding rna sequencing，lncrna-seq）是一种使用特定方法降低样本中rrna 的丰度，对富集到的 rna进行---构建，再对高通量测序仪产出的数据进行信息分析的研究方法。lncrna-seq可---获得样本中全部的lncrnas信息，对lncrnas的类别、功能进行的深入分析，从而快速准确地获得与特定生物学过程（例如发育、---等）相关 lncrna信息。
mirna测序
microrna(mirna)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子rna，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链rna前体经过dicer酶加工后生成，不同于sirna（双链）但是和sirna密切相关。microrna通过和靶基因mrna碱基配对引导沉默复合体（risc）降解mrna或抑制mrna的翻译，从而在转录后水平调控蛋白表达（新发现mirna也能在转录水平调控基因表达）。mirna在物种进化中相当保守，在动物、植物和---等中发现的mirna表达均有严格的组织特---和时序性。mirna在细胞生长和发育过程中起多种作用，包括调控发育、分化、凋亡和增殖等。
目前研究mirna的方法主要是realtime-pcr、生物芯片技术以及第二代测序技术。基于第二代测序技术的mirna测序，可以一次获得数百万条mirna序列，能够快速鉴定出不同组织、不同发育阶段、不同---状态下已知和未知的mirna及其表达差异，为研究mirna对细胞进程的作用及其生物学影响提供了有力工具。
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