难点与关键点
将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的---冲洗干净，用镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将---向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，基因敲除，灌注针进入主动脉后可在---的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米，然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内，这样由于主动脉瓣的关闭，灌注液很难进入主动脉，实验动物，而是沿着心室的切口流出，致使灌注失败。另 外，动物实验外包，灌注针插入成功后，一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室，这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注针插入右心室。
agomir是一种用于微rna功能研究的化学修饰的双链微rna模拟物，它可以模仿内源性的成熟微rna，与靶基因mrna结合，从而调节其表达。agomir与普通的微rna模拟物相比，具有更高的稳定性和活性，更易通过细胞膜和组织间隙，富集于ba细胞。因此，agomir可以用于体内实验，通过注射、吸入或喂食等方式给予动物，观察微rna对生理和病理过程的影响。
agomir的合成需要对微rna模拟物进行特殊的化学修饰，包括在反义链上加入2个liu代磷suan酯键（phosphorothioate）在5′端，4个liu代磷suan酯键在3′端，以及3′端加入胆固醇（cholesterol）基团，同时对全长核苷酸进行2′-甲yang基（2′-methoxy）修饰。这些修饰可以提高agomir的稳定性，防止被---酶降解，增强其与细胞膜的亲和力，促进其进入细胞。
动物睡眠剥夺模型，睡眠剥夺是研究睡眠的功能与发生机制的重要方法。睡眠剥夺模型的选择将直接影响睡眠剥夺实验的---性及准确性对睡眠剥夺实验结果具有重要的影响。现将几种常用的睡眠剥夺模型的方法评价及进展情况综述如下。
1.平台睡眠剥夺技术
此类方法主要是利用大鼠畏水及在水中无法进入睡眠的生活习性，通过在盛水的水槽中放置平台，让大鼠站立在平台上，因平台直径足够小(直径 6.5 cm 或更小)当大鼠进入 rem 时，因全身肌张力降低引起节律性低头触水以此来达到剥夺 rem 的目的， 此类方法简单易行无需复杂昂贵的设备，在不同条件的实验室均能开展因而应用广泛 其主要用来剥夺大鼠的rem ，可分为以下三种方法：
1.1单平台睡眠剥夺法
此方法早于 1964 年被应用在猫的睡眠剥夺实验中，不久以后有人将此方法应用于大鼠的睡眠剥夺实验，方法为将一圆柱形台 (直径约 65 m m )放置在长 400 mm宽340 m m高160 mm的水槽中，往水槽中加水至平台露出水面约 10 mm ，将 1 只大鼠置于台上，大鼠可在平台上站立，可进入 nrem，当大鼠进入 rem 时全身骨骼肌张力明显降低，颈部肌张力降低引起节律性低头触水从而无法进入 rem，采用 sp 实验可引起动物的体重及胸腺重量减轻，阿坝动物模型，上腺重量增加，血浆中上腺皮质酮增加，动物攻击行为增加，机体反应抑制等。
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