




20.primer设计的基本原则是什么?
答:引物设计的下列原则供您参考。
◆引物长度一般在18-35mer。
◆g-c含量控制在40-60%左右。
◆避免近3端有酶切位点或发夹结构。
◆如果可能避免在3端5个碱基有2个以上的g或c。
◆如果可能避免在3端1个碱基为a。
◆避免连续相同碱基的出现,---是要避免gggg或更多g出现。
◆退火温度tm控制在 58-60c 左右。
◆如果是设计点突变引物,突变点应尽可能在引物的中间。
21.为什么引物的od260/od280小于1.5 ?
答:引物应该全是dna,但是od260/od280的比值为什么那么低,怎么会有蛋白质污染?引物化学合成,哪里有机会污染到蛋白质?需要---的是od260/od280的比值不能用来衡量引物的纯度。od260/od280的比值过低一般是由于引物中c/t 的含量比较高所致。下表是一个20mer 同聚体引物的od260/od280的比值,清楚表明od260/od280的比值与引物的碱基组成密切相关。
二、使用说明
1、装载探针
对于---时间较短(通常为2小时以内)的细胞,先装载探针,后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞。对于细胞---
时间较长(通常为6小时以上)的细胞,pcr检测,先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞,pcr,后装载探针。
原位装载探针:本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000用无培养液稀释dcfh-da,pcr,使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液,加入适当体积稀释好的dcfh-da。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的dcfh-da的体积为1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。

蛋白质互作验证服务
在后基因组时代,基因的表达产物蛋白质作为生物功能直接的执行者和体现者,实时定量pcr,在生物集体的生理及病理中扮演着重要的角色。高通量的蛋白质组学研究技术可以在上述过程中筛选出具有潜在价值的生物标记和靶点。但是长期以来,---的蛋白质表达分析谱并没有提升我们对生物标志物的认识,其主要原因是差异蛋白的分析结果缺乏规模化的验证。
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