一、实验概述
八臂迷宫（radial arm maze）实验是为常用的评价动物学习记忆能力的模型之一，由olton等人于20世纪70年代中期建立。其基本依据是，控制进食的动物受食物的驱使对迷宫各臂进行探究，经过一定时间的训练，动物可记住食物在迷宫中的空间位置。该方法可同时测定动物的工作记忆（working memory）和参考记忆（reference memory）。八臂迷宫操作简便、可行，而且能区分短期的工作记忆和长期的参考记忆，现已被广泛用于学习记忆功能评价。
二、实验仪器
动物睡眠剥夺模型，睡眠剥夺是研究睡眠的功能与发生机制的重要方法。睡眠剥夺模型的选择将直接影响睡眠剥夺实验的---性及准确性对睡眠剥夺实验结果具有重要的影响。现将几种常用的睡眠剥夺模型的方法评价及进展情况综述如下。
1.平台睡眠剥夺技术
此类方法主要是利用大鼠畏水及在水中无法进入睡眠的生活习性，动物模型实验，通过在盛水的水槽中放置平台，让大鼠站立在平台上，动物实验室，因平台直径足够小(直径 6.5 cm 或更小)当大鼠进入 rem 时，因全身肌张力降低引起节律性低头触水以此来达到剥夺 rem 的目的， 此类方法简单易行无需复杂昂贵的设备，在不同条件的实验室均能开展因而应用广泛 其主要用来剥夺大鼠的rem ，可分为以下三种方法：
1.1单平台睡眠剥夺法
此方法早于 1964 年被应用在猫的睡眠剥夺实验中，不久以后有人将此方法应用于大鼠的睡眠剥夺实验，方法为将一圆柱形台 (直径约 65 m m )放置在长 400 mm宽340 m m高160 mm的水槽中，往水槽中加水至平台露出水面约 10 mm ，将 1 只大鼠置于台上，大鼠可在平台上站立，可进入 nrem，当大鼠进入 rem 时全身骨骼肌张力明显降低，自贡动物模型，颈部肌张力降低引起节律性低头触水从而无法进入 rem，采用 sp 实验可引起动物的体重及胸腺重量减轻，上腺重量增加，血浆中上腺皮质酮增加，动物攻击行为增加，机体反应抑制等。
一、主要试剂材料
细胞自噬染色检测试剂盒(mdc法)（solarbio，g0170）
dmem（hyclone，sh30023）
fbs（hyclone，sh30070.03）
青链mei素（hyclone，sv30010）
胰酶（hyclone，sh30042.01）
pbs（南京生兴，sn331）
co2培养箱（thermo fisher，3131）
confocal荧光显微镜（zeiss，lsm710）
二、实验方案
1、mg63及其耐药株培养在含10%胎牛xue清的dmem完全培养基中培养，动物实验，培养在37℃含5%co2的细胞培养箱中培养，当---至80%-90%时，用胰酶将细胞---下来，按照1:3比例传代。
2、将1×106个细胞种在3.5cm玻璃底培养皿中，将细胞放入培养箱中培养过夜后，分别加入mir-22、cisp1atin、cisp1atin和mir-22后，将细胞放入培养箱中培养12h、24h。3、将细胞从培养箱中取出，去除培养基，用300～400μl的1×wash buffer清洗细胞1次，弃上清。4、加入适量mdc stain，轻轻混匀。5、室温避光染色15～45min。6、用300～400μl的1×wash buffer清洗细胞2次，弃上清。7、加入100μl的collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，拍照。
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