




单核苷酸多态性( snp )实验
snp (single nucleotide polymorphisn即单核苷酸多态性 ,是由于单个核苷酸改变而导
实验方法原理:
snp (single nucleotide polymorphisn即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导
二、操作步骤:
1. 所有在纯化系统里使用的溶液当日都需要经过 0.22μm 的滤膜抽滤、脱气处理;保存 4℃ 冰箱里的缓冲液若要在室温使用需恢复至室温后抽滤脱气;
2. 样品上柱纯化前,需先滤膜过滤,少量样品可用离心(13000rpm,荧光定量pcr,10min);
3. 依次用水、缓冲液洗泵;设置流速和柱前警报压(压力值参阅层析柱及填料说明书,取较小的一个大耐受压力)。防止柱中进入气泡,影响分离效果;
4. 当柱子限压在 0.3mpa,或者在限压状态---速很低时,ph valve 中的 restirtor 可以切换成 off line,即显示 by-pass 状态;
5. 当需要通过仪器上样环上样时,将 w1 阀口处换成带透明短软管的阀门,---怎么做,从此处阀门位通过倒吸样品上样;
6. 进样阀「inject」为上样状态。上样结束可将进样阀切换回「load」状态。并用纯水认真清洗上样环至少 3 次;将 w1 阀口处换回原来接头阀门。
7. 纯化结束后,用纯水清洗泵和平衡柱子;再用 20% 的---清洗泵以及系统。长期不用,层析柱应保存在 20% 的---中,泵放置在 20% ---中;
8. 实验结束后及时倾倒废液瓶里的废液;

emsa实验
emsa:凝胶迁移或电泳迁移率检测是一种检测蛋白质和dna序列相结合的技术,初用于研究dna结合蛋白和其相关的dna结合序列相互作用,---多少钱,可用于定性和定量分析。分为2种类型:同位素标记探针,非同位素标记探针。
通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32p同位素标记的dna或rna探针一同保温,在非变性的聚bing烯凝胶电泳上,江西pcr,分离复合物和非结合的探针。dna-复合物或rna-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的dna结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测rna结合蛋白时,依据目的rna结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的dna或rn片duan和gua核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定dna或rna结合蛋白的特---。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。
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