聚合酶链式反应(pcr)
操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
1qpcr buffer
5 μl
dntp mix( 2mm )
4 μl
引物1(10pm)
μl 2
引物2 ( 10pm)
2μl
taq酶(2u/ul)
1 μl
dna模板( 50ng-1μg/μl )
1 μl
加ddh2o至
μl 50
视pcr仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置pcr仪上执行扩增。-般:在93°c
预变性3-5min ,进入循环扩增阶段: 93°c 40s***58°c 30s***72°c 60s ,循环30-35
次,后在72°c保温7min。
3.结束反应, pcr产物放置于4°c待电泳检测或-20°c长期保存。
4. pcr的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100ul进行抽提反应混合液,以
除去石蜡油;否则,直接取5- 10μl电泳检测。
蛋白质质谱鉴定服务
蛋白质(protein)是有机大分子,是构成细胞的基本有机物和生命活动的主要承担者。蛋白质在催化生命体内各种反应进行、---、抵御外来物质入l侵及控制遗传信息等方面都起着重要的作用。蛋白质的一级结构是---酸序列,通过鉴定---酸序列来匹配它的蛋白质,这是定性研究,是蛋白质组学的基础,也是蛋白质组学的重要技术之一。
质谱一般由离子源、分析器(mass ---yzer)和离子检测器(detector)三部分组成。传统的质谱仅用于小分子挥发物质的分析,但随着新的离子化技术的出现,广西pcr,如基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(maldi-tof)和电喷雾电离质谱(esi-ms)等,质谱技术的出现为蛋白质分析提供了一种新的途径。现在蛋白质组学基本研究手段是:以生物质谱技术为,对蛋白质进行---、高通量分离、鉴定和分析。
蛋白质质谱鉴定的基本原理是用蛋白酶将蛋白质---成肽段混合物,---怎么做,经maildi或esi等软电离手段将其离子化,然后通过分析器将具有特定质核比的肽段离子分离开来。通过实际谱图和理论上蛋白质经过蛋白酶---后产生的一级质谱峰图和二级质谱峰图进行的比对,进行蛋白鉴定。
分子生物学服务
公司建有100平米分子实验室,实时荧光定量pcr,配备有pcr仪、定量pcr仪、电泳仪、恒温培养箱、恒温摇床、垂直电泳仪、蛋白转印仪、蛋白发光成像仪等设备。分子组---毕业于农业大学、华中科技大学同济医学院、浙江理工大学等高校生物医学相关,全部具有硕士研究生以上---,熟练掌握分子生物学相关实验,可开展多种分子生物学检测服务。
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