3d细胞培养
3d多细胞肿liu球是在体外应用组织培养方法使肿liu细胞以多细胞集聚体的形式生长成为具有三维结构的球体。与传统的2d贴壁细胞培养模型相比，3d多细胞肿liu球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用，从而贴近肿liu组织中相应的病理生理特征。因此， 3d多细胞肿liu球培养模型已经逐渐应用于gan细胞培养和分化、ai症研究、yao物和毒性筛选及组织工程等特定应用中。虽然3d多细胞肿liu球模型具有更---的实体肿liu生理相关性，但是与2d贴壁细胞培养模型相比，获得大量相对统一的3d多细胞肿liu球模型需要-系列的培养过程和表征手段。
细胞冻存有哪些注意事项？
细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分---。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;细胞储存在液氮中，温度达-196℃，细胞实验外包，理论上储存时间是的。
细胞冻存的步骤：
配制含 10%dmso 或甘油、10~20% 小牛的冻存培养液;
取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用 pbs 清洗。
去除 pbs，加入适量胰蛋白酶 (覆盖培养皿表面) 把单层生长的细胞---下来;
离心 1000rpm，5min;
去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的终密度为 5×106/ml~1×107/ml;
将细胞分装入冻存管中，每管 1~1.5 ml;
在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者;
冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱 2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
2、快速脂质体转染法操作步骤如下 [方法二]：
(1) 以 5×105 细胞/孔接种 6 孔板 (或 35 mm 培养皿) 培养 24 小时，细胞实验外包费用，使其达到 50～60% 板底面积。
(2) 在试管中配制 dna/脂质体复合物方法如下：
在 1 ml 无 dmem 中稀释 psv2-neo 质粒 dna 或供体 dna。
旋转 1 秒钟，再加入脂质体悬液，旋转。
室温下放置 5～10 分钟，凉山细胞实验，使 dna 结合在脂质体上。
(3) 弃去细胞中的旧液，用 1 ml 无 dmem 洗细胞一次后弃去，向每孔中直接加入 1 ml dna/脂质体复合物，37℃ 培养 3～5 小时。
(4) 再于每孔中加入 20%fcs 的 dmem，继续培养 14～24 小时，
(5) 吸出 dmem/dna/脂质体混合物加入新鲜 10%fcs 的 dmem，2 ml/孔，再培养 24～48 小时。
(6) 用细胞刮或---法收集细胞，以备分析鉴定。
3、稳定的脂质体转染方法如下：
(1) 接种细胞同前，细胞长至 50% 板底面积可用于转染。
(2)dna/脂质体复合物制备转染细胞同前 (2)、(3) 步骤。
(3) 在每孔中加入 1 ml、20%fcs 的 dmem，细胞实验外包公司，37℃ 培养 48 小时。
(4) 吸出 dmem，用 g418 选择培养液稀释细胞，使细胞生长一定时间，筛选转染，方法参照细胞筛选法进行。
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