lncrna测序
长链非编码rnas（long non-coding rnas，lncrnas）一般是指长度大于200 nt的rna，位于细胞核内或胞浆中，不参与蛋白质编码功能，以rna形式在多种层面上（表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等）调控基因的表达水平，在生命活动中具有重要作用。
长链非编码rna测序（long non-coding rna sequencing，lncrna-seq）是一种使用特定方法降低样本中rrna 的丰度，对富集到的 rna进行---构建，再对高通量测序仪产出的数据进行信息分析的研究方法。lncrna-seq可---获得样本中全部的lncrnas信息，对lncrnas的类别、功能进行的深入分析，从而快速准确地获得与特定生物学过程（例如发育、---等）相关 lncrna信息。
16.长链引物为什么出错的几率非常高？
答：引物合成时，每一步反应效率都不能达到100%，产生碱基插入、缺失、置换突变的因素客观条件都有一直存在。引物链越长，突变的频率累加起来就越高。研究人员总希望合成的引物万无一失，这种心情可以理解。但是---pcr扩增，不可能---扩增产物中没有突变，引物合成也不可能---100%正确。要知道，引物合成中发生错误（非人为因素）的频率，比任何高保---温聚合酶pcr扩增过程所产生的频率都要高。做引物合成，长链引物合成，您要有引物中部分引物可能有突变的思想准备。
17.如果测序发现突变，该如何处理？
答：遇到这种情况，首先和---合成厂家取得联系，生产人员会检查生产的原始记录，主要是核对合成序列是否和定单一致，他们在电脑中一般会保留所有原始数据。在确认引物合成序列没有输错的情况下，建议重新挑取测序，可能会找到正确的。根据经验，40个碱基以下的引物，测1-2个就可以了；40个以上的---是用于全片段拼接合成的，---，就需要多测一些了。一般情况下，每个突变的位点都不一样，实时荧光定量pcr，提示正确的总是有的，就是如何找到它。也可以要求公司将引物免费重合一次，不过重合的引物和次的引物一样，都可能含突变，不会因为重合的引物就减少您的遇到问题的几率。基因拼接过程中，如果发现一段区域突变点不多，就多测几个，---怎么做，否则就重合一下引物。
rna提取及注意事项
研究基因的表达和调控时，需要从组织或细胞中分离纯化rna。rna的高低经常影响rt-pcr、cdna库构建和northern blot等分子生物学实验的成败。
主要试剂
trizol是一种新型总rna抽提试剂，内含异---胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的---酶。
1.
trizol试剂含有，具有毒性和---性，注重操作。
2.
rnase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉，重庆pcr，注重配带手套，样品尽可能盖严。
3. 细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低后得率，因为一部分rna会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质（结缔组织和骨除外）。在清洗和裂解细胞时在低温下操作，防止在操作过程中释放的内源rnase降解了rna。
4. 酵母和一些---由于细胞壁的---结构，可以加入trizol试剂同时加入无rnase的玻璃珠并剧烈振荡，使细胞裂解充分。
2-8℃ 避光保存一年。
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