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  全转录组测序 

全转录组是指特定组织或细胞在特定状态下所有转录产物的总和，包括mrna和各种noncoding rna。我们知道生物体本身的转录过程是一个动态变化且十分复杂的分子作用网络，如果只是对某个单一rna分子的研究，pcr，有时并不能准确的发现分子作用机制。而竞争性内源rna(cerna)理论阐述了一种全新的转录调控模式：cerna（包括lncrna、circrna、mrna、假基因等）分子能够通过mirna应答元件（microrna respe element， mre）竞争性地结合相同的mirna来调节彼此的表达水平。举个例子：mirna会导致基因沉默现象发生，而如果lncrna竞争性结合了mirna，从而影响了mirna基因沉默功能实现。

      cerna是目前转录调控领域的---内容之一，通过全转录组研究能够系统性的阐述cerna的分子作用机制。目前对全转录组简便的方法就是构建2个测序---分别进行测序。标准的生物信息学分析能够得到mrna、lncrna、circrna、mirna各自的研究内容，pcr，靶向调控网络、cerna网络、共表达网络分析可以将这几种rna联合起来分析，从而发现新的调控网络模型。去除rrna的链特------，含有的rna信息含量十分丰富，通过测序和生物信息学分析能够得到mrna、lncrna、circrna的鉴定及注释信息。不过该---构建时会进行片段化选择从而滤掉了small rna的信息，所以需要另外再构建一个small rna---，进行测序分析后可以得到mirna和其他small rna的鉴定及注释信息。全转录组测序方案路线图如下所示：

13.合成的引物5端是否有磷酸化

答：合成的引物5为---，没有磷酸基团。如果需要您可以用多核苷酸激酶进行5′端磷酸化，或者要求引物合成公司合成时直接在5′或3′端进行磷酸化，需要另外收费。

14.引物片段退火后不能连接到载体上是什么问题？

连接反应需要引物的5’磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上，引物需要磷酸化。磷酸化的产物如果还不能连接载体上，需要检查载体的酶切效果，需要---引物退火的条件。sirna分子具有特殊的对称结构，退火的难度较大，退火时需要提高退火温度。