单细胞测序（英语：single cell sequencing）采取优化的下一代dna测序技术（ngs）检测单细胞的序列，可以获得特定微环境下的细胞序列差异以方便研究其功能差异等。对个体细胞的dna测序可以帮助我们了解例如在中的小范围细胞的变异；对其进行rna测序可以帮助我们了解和鉴别不同的细胞类型与其表现的基因，对研究发育生物学等有较大裨益。
分离单细胞
在全基因组扩增和测序前，有很多方法可以分离细胞个体，其中流式细胞术（facs）较为常用。个体细胞可以用显微操作来收集，这样较为快捷而且成本较低，但是比较有技术难度，而且显微镜下对细胞的错误分类容易影响实验结果。激光捕获显微切割技术（lcm）亦可以用来收集单细胞。但是尽管激光捕获显微切割可以保留样本细胞在组织中的空间位置，但是捕获单细胞的时候容易连带周围细胞的物质。高通量的细胞个体分离还可以使用微流控技术。微流控技术和流式细胞技术都能准确而自动地分离无偏样本。但是，两种方法都要求首先将细胞从其为环境中脱离，因此可能在rna表达分析中造成对转录数据的干扰。
动物组织细胞基因组dna提取
操作步骤
1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，荧光定量pcr，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶k
（500ug/ml）20μl，混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另
一离心管中。
2.加2倍体积异，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul 吸头挑出，凉干，用200ul te 重新溶解。（可进行pcr反应等，需要进一步纯化的按下列步骤进行）
3.加等量的酚??振荡混匀，离心12000 rpm，pcr，5min。
4.取上层溶液至另一管，加入等体积的?，振荡混匀，离心12000 rpm，5min。
5. 取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/l氨加入2倍体积的无水---，混匀后室温沉淀2min ，离心12000 rpm ，10min。
6.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。
7.用1ml 70%---洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ， 5min。
8.小心倒掉上清液，pcr实验室，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。
9.加200ul te重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?c20℃保存备用。
10.吸取适量样品于genequant上检测浓度和纯度。
rna提取
1.弃去培养液，用pbs清洗两次1-2。
2.弃去pbs，用1000u1吸干净残余pbs。
3.加1ml trizol研磨b 41。
4. 1.5miep管标号与每孔相对应备用。
5.研磨好的溶液转移至对应的 ep管。
6.往每个ep管中加入250ul，剧烈震荡30s， 冰上静置12min[问l。
7. 所有样品4c离心，转速: 13500转1分钟，时间: 15min.
8. 再次标记一批同样编号ep管。
9.离心后吸上清液400u1移入相应编号的ep管中，再加入400ul异充
分混匀。4c冰箱35min。
10. 4c离心，转速: 13500转1分钟，时间: 10min.
11.弃去.上清液，加1m175%---，轻摇7]。
12. 4c离心，10600转/分钟，时间: 5min.
13. 弃上清液滤纸吸干。
14. 加depc水10ul溶解，-80c保存。进行逆转录前测浓度。
组织rna提取
1、剪米粒大小组织块放入ep管中标号。
2、ep管中加300ul trizol浸泡30分钟或更久。
3、用研磨棒研磨，以肉眼很难看到组织为宜。
4、加700u1 trizol静 置5分钟。
pcr-南京英瀚斯生物科技-pcr引物设计由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。行路致远，---。南京英瀚斯生物科技有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的---，更矢志成为技术合作具有竞争力的企业，与您一起飞跃，共同成功!
联系我们时请一定说明是在100招商网上看到的此信息，谢谢！
本文链接：https://tztz316162.zhaoshang100.com/zhaoshang/282592861.html
关键词：
滇公网安备 53011202000392号