细胞实验外包-吉林细胞实验-南京英瀚斯生物科技

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    2024-1-25

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软琼脂培养克l隆形成试验基本步骤:

(1)取对数生长期细胞,用0.25%胰蛋白酶---并轻轻吹打,使之成为单细胞,作活l细胞计数,细胞实验外包,用含20%胎牛血l清的dmem培养液调整细胞密度至1x106细胞/l。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。

(2)用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液,高压灭菌后,维持在40日中不会凝固。

(3)按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2xdmem培养基(含有2x和20%的小牛血l清)混合后,取3ml混合液注入直径6cm平皿中(10cm平皿加7~ 10ml),冷却凝固,可作底层琼脂置co2温箱中备用。

(4)按1:1比例让0.7%的琼脂糖和2xdmem培养基在无菌试管中相混以后,再向管中加入0.2ml的细胞悬液,充分混匀,注入铺有1.2%琼脂糖底层平皿中,逐形成双琼脂层。待上层琼脂凝固后,置入37回5%co2温箱中培养10~14天。

(5)把平皿放置在倒置显微镜下,观察细胞数。计算形成率。软琼脂培养法常用检测肿l瘤细胞和转化细胞系。试验中琼脂与细胞相混时,琼脂温度不宜超过40日。接种细胞的密度每平方厘米不超过35个,一般6cm的平皿接种1000个细胞。正常细胞在悬浮状态下不能增殖,不适用于软琼脂克l隆形成试验。

软琼脂集落形成率实验(软琼脂克l隆)

将1.2%低熔点琼脂糖与2x细胞培养基以1:1的体积比混合制备0.6%的底层琼脂,6孔板中每个孔1.4ml温室凝固,取对数期细胞,胰酶---后吹散成单个细胞悬液,计数,并调细胞浓度为10000个/ml,将0.6%低熔点琼脂糖与2x细胞培养基以1:1的体积比混合,制备0.3%的上层琼脂,每孔加1ml 上层琼脂和100ul单细胞悬液(约1000ell/wel), 混匀,室温凝固。置于37目,5%co2的细胞培养箱中培养2-3周,计数含50个细胞以上得克l隆,计算细胞集落形成率,spotll 采集图像。








流式细胞分选

流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,吉林细胞实验,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,细胞实验外包,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的--种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单ke隆分选,能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行速分选纯化、高通量单分选或细胞芯片制备。分选后的细胞能直接用于培养、移植、---提取、单细胞pcr扩增或原位杂交等,可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。硬件中样本细胞丢弃的比例低于5%,---样本中目标细胞的高回收率。





平板克l隆形成实验基本步骤::

1、取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%胰 蛋白酶---并吹打成单个细胞,并把细胞悬浮在10%胎牛的dmem培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200 个细胞的梯度密度分别接种含10ml 37预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37团5% co2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。

3、经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的时,终止培养。弃去上清液,用pbs小心浸洗2次。加4%---固定细胞5ml固定15分钟。然后去固定液,细胞实验外包公司,加适量gimsa应用染色液染10~30分钟,然后用流水缓慢洗去染色液,空气干燥。

4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数,或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的数。后计算形成率。形成率= (数/接种细胞数) x100%平板形成试验方法简单,适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大。平板形成试验方法简单,适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞- -定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大。









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