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22.同样的od用page检测，eb染色为什么深浅不一？

答：通常可以用eb染色的方法来判断双链dna的量(如质粒dna)，因为eb可以嵌合到双链dna中。而合成的单链dna，由于碱基组成不同，形成二级结构的可能性不同，eb的染色程度也会有差异，比如oligo(dt)等不形成二级结构，eb染色效果就非常差。所以不要用eb染色的方法来定量，而用紫外分光光度计检测。同样道理，用eb染色来照片不适合所有引物。

23.引物不纯会有什么后果？

答：引物不纯可能会导致：1)非特---扩增；2)无法用预先设计在引物5′端酶切位点的酶切开，---是没有保护碱基的引物；3) 用于测序出现双峰或乱峰。解决办法重新合成或重新纯化。

24.已经溶解的引物，fish检测，为什么原先使用正常，而过一段时间再使用就不好了？

答：如果溶解引物的水ph过低或污染了菌或---酶，会使引物降解。使用时没有充分解冻混合，液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物，避免反复冻溶。建议使用10mmt ris ph7.5缓冲液溶解引物，因为有些蒸馏水的ph值比较低（ph4-5）， 引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题，而是pcr使用材料---是模板的与先前使用的不完全一致。

染色质免l疫共沉淀技术(chip)

基于体内分析而发展的染色质免l疫沉淀分析chr omat in immunoprecipitat ionassay kit， chip)技术可以真实、完整地反映结合在dna序列上的调控蛋白。由于chip采用甲醛固定活l细胞或者组织的方法，因此能比较真实的反映细胞内tf与promoter的结合情况，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。近年来，这种技术得到不断的发展和完善。采用结合微阵列技术在染色体基因表达调控区域检查染色体活性，是深入分析癌l症、心血l管病以及中央神经系统紊乱等---主要通路的一-种非常有效的工具。

染色质免l疫沉淀分析(chip) 的基本原理是在活l细胞状态下，当用甲醛处理时，相互靠近的蛋白与蛋白、蛋白与---(dna或rna)之间会产生共价键。细胞内，当f与promoter相互结合时，它们必然靠的比较近或者契合在一起，这个时候用甲醛处理，能使它们之间产生共价键。固定的蛋白质dna复合物通过超声或酶处理将其随机切断为-定长度范围内的染色质小片段然后通过抗原抗l体的特---识别反应沉淀此复合体，特---地富集目的蛋白结合的dnal片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与dna相互作用的信息。通过qpcr或二代测序，筛选与目的蛋白互作的未知dna信息。