fish检测-西藏pcr-英瀚斯

rna pull down 检测

rna   pull down：rna沉淀检测，是检测rna结合蛋白与其靶rna之间相互作用的主要实验方法之一。使用体外转录将rna进行生物素标记，并与细胞蛋白裂解液孵育，形成rna-蛋白复合物。复合物通过磁珠结合后分离，复合物纯化洗脱后通过western blot验证检测特性的蛋白。若筛选可能结合的蛋白通过质谱实验进行检测筛选。

聚合酶链式反应(pcr)

操作步骤

1.在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

1qpcr buffer

5 μl

dntp mix( 2mm )

4 μl

引物1(10pm)

μl 2

引物2 ( 10pm)

2μl

taq酶(2u/ul)

1 μl

dna模板( 50ng-1μg/μl )

1 μl

加ddh2o至

μl 50

视pcr仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置pcr仪上执行扩增。-般:在93°c

预变性3-5min ，进入循环扩增阶段: 93°c 40s***58°c 30s***72°c 60s ，循环30-35

次，后在72°c保温7min。

3.结束反应， pcr产物放置于4°c待电泳检测或-20°c长期保存。

4. pcr的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油，fish检测，需用100ul进行抽提反应混合液，以

除去石蜡油;否则，直接取5- 10μl电泳检测。