细胞实验外包-阿坝细胞实验-南京英瀚斯

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软琼脂培养克l隆形成试验基本步骤:

(1)取对数生长期细胞,用0.25%胰蛋白酶---并轻轻吹打,使之成为单细胞,作活l细胞计数,用含20%胎牛血l清的dmem培养液调整细胞密度至1x106细胞/l。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。

(2)用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液,高压灭菌后,维持在40日中不会凝固。

(3)按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2xdmem培养基(含有2x和20%的小牛血l清)混合后,取3ml混合液注入直径6cm平皿中(10cm平皿加7~ 10ml),冷却凝固,可作底层琼脂置co2温箱中备用。

(4)按1:1比例让0.7%的琼脂糖和2xdmem培养基在无菌试管中相混以后,阿坝细胞实验,再向管中加入0.2ml的细胞悬液,充分混匀,注入铺有1.2%琼脂糖底层平皿中,逐形成双琼脂层。待上层琼脂凝固后,置入37回5%co2温箱中培养10~14天。

(5)把平皿放置在倒置显微镜下,观察细胞数。计算形成率。软琼脂培养法常用检测肿l瘤细胞和转化细胞系。试验中琼脂与细胞相混时,琼脂温度不宜超过40日。接种细胞的密度每平方厘米不超过35个,一般6cm的平皿接种1000个细胞。正常细胞在悬浮状态下不能增殖,不适用于软琼脂克l隆形成试验。

软琼脂集落形成率实验(软琼脂克l隆)

将1.2%低熔点琼脂糖与2x细胞培养基以1:1的体积比混合制备0.6%的底层琼脂,6孔板中每个孔1.4ml温室凝固,取对数期细胞,胰酶---后吹散成单个细胞悬液,计数,并调细胞浓度为10000个/ml,将0.6%低熔点琼脂糖与2x细胞培养基以1:1的体积比混合,细胞实验外包,制备0.3%的上层琼脂,每孔加1ml 上层琼脂和100ul单细胞悬液(约1000ell/wel), 混匀,室温凝固。置于37目,5%co2的细胞培养箱中培养2-3周,计数含50个细胞以上得克l隆,计算细胞集落形成率,spotll 采集图像。








细胞实验介绍——流式细胞术检测细胞周期和凋亡

流式细胞术检测细胞周期:

细胞周期:指细胞从---次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由g0/g1期、s期、g2期和m期组成。g0/g1期:有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,进入下一个细胞周期,或者进入静止期(g0期),而g0期从dna含量上无法与g1期区分,细胞实验外包,细胞开始rna和蛋白质的合成,但dna含量仍保持二倍体。s期:dna开始合成,细胞核内dna的含量介于g1期和g2期之间。g2期和m期:当dna成为4倍体时,细胞进入g2期。g2期细胞继续合成rna及蛋白质,直到进入m期。

pi法是---的周期检测方法。pi为插入性---荧光染料,能选择性的嵌入---dna和rna双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与dna的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的dna分布状态,从而计算出各个期的百分含量。

一般流程:细胞收集-70%酒精固定过夜-pi染色-流式细胞仪检测。

细胞凋亡:细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生。破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(ps)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在之前,检测ps的表达,能反映早期凋亡。annexinv是ca2+依赖的磷脂结合蛋白,对ps有---的亲和性,并且可以与暴露于细胞外的ps相结合。利用这一原理,可以将annexinv标记荧光来识别早期的细胞凋亡。通常利用annexinv-fitc和碘化丙啶(pi)来区分凋亡和坏---。pi的膜通透性很差,因而只能标记坏死的细胞。

一般流程:细胞收集-pi-annexinv标记-流式细胞仪检测。

结果示例:





                                   图 a 细胞周期检测图;b 细胞凋亡检测图


细胞检测服务

作为生物体结构和功能的基本单位,细胞在机体的各项---的生命活动中发挥着重要的作用,与此同时,细胞的生理过程,细胞实验外包费用,在一定程度上也是机体生命活动的反应。因此利用多种精密仪器,结合特---的检测试剂,对体外培养的细胞直接检测其增殖的基本过程,或对细胞进行不同的处理后检测细胞生活周期内各项指标的变化,从而深入揭示细胞---的具体机制。








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