22.同样的od用page检测，eb染色为什么深浅不一？
答：通常可以用eb染色的方法来判断双链dna的量(如质粒dna)，因为eb可以嵌合到双链dna中。而合成的单链dna，由于碱基组成不同，形成二级结构的可能性不同，eb的染色程度也会有差异，比如oligo(dt)等不形成二级结构，eb染色效果就非常差。所以不要用eb染色的方法来定量，而用紫外分光光度计检测。同样道理，---，用eb染色来照片不适合所有引物。
23.引物不纯会有什么后果？
答：引物不纯可能会导致：1)非特---扩增；2)无法用预先设计在引物5′端酶切位点的酶切开，pcr引物设计，---是没有保护碱基的引物；3) 用于测序出现双峰或乱峰。解决办法重新合成或重新纯化。
24.已经溶解的引物，为什么原先使用正常，而过一段时间再使用就不好了？
答：如果溶解引物的水ph过低或污染了菌或---酶，会使引物降解。使用时没有充分解冻混合，液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物，避免反复冻溶。建议使用10mmt ris ph7.5缓冲液溶解引物，因为有些蒸馏水的ph值比较低（ph4-5）， 引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题，而是pcr使用材料---是模板的与先前使用的不完全一致。
7.如何检测引物的纯度？
答：实验室方便的作法是用page方法。使用加有7m尿素的16%的聚---凝胶进行电泳。取0.2-0.5od的引物，用尿素饱和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到饱和，上样前加热变性(95℃，2mins)。加入尿素的目的一是变性，二是增加样品比重，容易加样。600v电压进行电泳，一定时间后(约2-3小时)，剥胶，用荧光tlc板在紫外灯下检测带型，在主带之下没有杂带，说明纯度是好的。如果条件许可，也可以用eb 染色或银染方式染色。
而有的厂家提供maldi-tof质谱qc控制，从而保障了合成的准确率：
bioneer使用多重maldi-tof质谱仪进行全自动装载及监测。 每份样品的质谱分析数据将自动插入到寡核苷酸的信息单中。bioneer是上仅有的几个对生产的每份核苷酸 (单个寡核苷酸和高通量和成) 都用maldi-tof质谱仪检测进行核苷酸qc检测的厂商，荧光定量pcr，而且免费提供质谱数据。
8.如何计算引物的浓度？
答：引物保存在高浓度的状况下比较稳定。引物一般配制成10-50pmol/ul。 一般情况下，建议将引物的浓度配制成50pmol/ul，加水的体积（微升）按下列方式计算：v (微升)= od数*（乘）33 *（乘）*（乘）20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以从合成报告单上获得。如果需要配制成其他浓度，按上述公式换算。
注意：1 od260= 33 ug/ml.
3、参数设置
使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测---前后荧光的强弱。dcf的荧光光谱和fitc非常相似，可以用fitc的参数设置检测dcf。dcf的激发光谱和发射光谱参考下图。
4、其它说明
阳性对照可以按照1：1000的比例使用。例如装载好探针的细胞共1毫升，可以加入1微升的阳性对照---。通常---后20-30分钟内可以观察到非常---的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在---后30分钟内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，pcr，可以适当降低活性氧阳性对照的浓度。
另外，对于某些细胞，如果发现没有---的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1：2000-1：5000稀释dcfh-da，使装载探针时dcfh-da的浓度为2-5微摩尔/升。探针装载的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整。
荧光定量pcr-pcr-英瀚斯由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司是从事“组织病理,细胞生物,分子生物学平台,动物模型科研外包服务”的企业，公司秉承“诚信经营，用心服务”的理念，为您提供---的产品和服务。欢迎来电咨询！联系人：戴经理。
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