细胞实验外包-温州细胞实验-南京英瀚斯

细胞实验介绍——慢---建立稳转细胞系

慢---包装：公司使用3质粒慢---包装系统，慢---系统使用plko.1-egfp、pspax2、pmd2.g，过表达慢---系统使用plvx-acgfp、pspax2、pmd2.g三质粒系统，将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至hek293t细胞中，培养48h后，细胞实验外包，收集上清。使用genecopo公司慢---颗粒纯化试剂盒将慢---纯化。纯化后留取部分检测---滴度，其余---冻存于-80℃冰箱中。

滴度检测：将---颗粒使用梯度稀释，分别293t细胞，细胞实验外包费用，72h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算---滴度。

细胞：在---前---对细胞进行计数，接种约10000个细胞于12孔板中，培养过夜后使用无培养基稀释---，加入12孔板中对细胞进行，---数量根据细胞的moi加入（若无moi，需做---梯度：1，5，10，温州细胞实验，50，100 5个梯度对细胞），6h后去除含---溶液，加入完全培养基细胞培养，培养48h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光强度。同时加入puromycin对细胞筛选，筛选约2周时间。细胞筛选好后，使用定量pcr和western blot检测目的基因的稳定表达情况。

实验流程：慢---质粒构建-hek293t细胞培养-质粒转染293t细胞----收集----纯化----滴度检测-细胞-稳转细胞筛选-稳转细胞鉴定

结果示例：

                                               图 a ---滴度检测；b 目的细胞---效果图

选择实验外包公司需要注意哪些事项？

报价

报价单一定要有明细。规范的外包公司会根据实验方案里的各项内容进行核算报价，材料是多少、人工检测是多少，可以看到每一笔钱花在哪里，避免笼统的报价。另外注意不要一味地追求，做过实验的都知道实验成本，外包还需要考虑人工成本。如果价格过低，实验数据就难以------和来源了。当然报价也不能虚高，做好是能在有限的经费中尽量---课题完整性。可以要求公司根据预算来调整优化方案，尽可能节约成本。