pcr检测-英瀚斯-上海pcr

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    2024-2-17

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外显子测序

外显子组测序(exome-seq)是对定向富集的基因组dna进行高通量测序,它能够以相对低的费用对人类外显子组进行拷问。2009年,外显子组捕获工具的出现,让外显子组测序这种技术迅速红起来。到目前为止,已有超过1万个外显子组被测序。

如今有多家公司推出了外显子组捕获试剂,包括罗氏nimblegen、安捷伦、illumina,还有现在的华大基因。这些方法究竟孰优孰劣,斯坦福大学医学院遗传学系的研究人员对市场上三个主流的外显子组测序平台进行了比较。该研究结果发表在上。研究人员利用安捷伦、illumina和nimblegen的外显子组测序平台对同一个人类---样品进行分析。他们的结 果表明,nimblegen平台作为一个使用高密度重叠探针的平台,尽管覆盖了较少的基因组区域,但在灵敏检测小的变异时所需的测序量也少。在同样获得80m测序数据的情况下,nimblegen有97%的目标序列达到10x以上的测序---,而其他产品只有90%。而安捷伦和illumina的探针能够在低密度下捕获更多数量的变异。此外,illumina还捕获了未翻译的区域,这是nimblegen和安捷伦平台无法靶定的。研究人员还比较了同一样品的外显子组测序和全基因组测序(wgs),上海pcr,显示外显子组测序能够检测到wgs错过的小变异。

除了文中提到了三个主流平台,外显子组捕获方面的新产品也在不断推出,pcr检测,研究人员的选择也将更广泛。罗氏nimblegen即将推出新一代的外显子液相捕获产品。这一新产品将可捕获64m的基因组序列,包括外显子以及mirna,它含与其他nimblegen液相捕获产品相同的2.1m高密度探针,以高xiao、均一、特异、的定向捕获。






rna提取及注意事项



研究基因的表达和调控时,需要从组织或细胞中分离纯化rna。rna的高低经常影响rt-pcr、cdna库构建和northern blot等分子生物学实验的成败。

主要试剂

trizol是一种新型总rna抽提试剂,fish检测,内含异---胍等物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的---酶。

1.

trizol试剂含有,具有毒性和---性,注重操作。

2.

rnase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉,注重配带手套,样品尽可能盖严。

3. 细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低后得率,因为一部分rna会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质(结缔组织和骨除外)。在清洗和裂解细胞时在低温下操作,防止在操作过程中释放的内源rnase降解了rna。

4. 酵母和一些---由于细胞壁的---结构,荧光定量pcr,可以加入trizol试剂同时加入无rnase的玻璃珠并剧烈振荡,使细胞裂解充分。

2-8℃ 避光保存一年。






蛋白质质谱鉴定服务

蛋白质(protein)是有机大分子,是构成细胞的基本有机物和生命活动的主要承担者。蛋白质在催化生命体内各种反应进行、---、抵御外来物质入l侵及控制遗传信息等方面都起着重要的作用。蛋白质的一级结构是---酸序列,通过鉴定---酸序列来匹配它的蛋白质,这是定性研究,是蛋白质组学的基础,也是蛋白质组学的重要技术之一。

质谱一般由离子源、分析器(mass ---yzer)和离子检测器(detector)三部分组成。传统的质谱仅用于小分子挥发物质的分析,但随着新的离子化技术的出现,如基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(maldi-tof)和电喷雾电离质谱(esi-ms)等,质谱技术的出现为蛋白质分析提供了一种新的途径。现在蛋白质组学基本研究手段是:以生物质谱技术为,对蛋白质进行---、高通量分离、鉴定和分析。

蛋白质质谱鉴定的基本原理是用蛋白酶将蛋白质---成肽段混合物,经maildi或esi等软电离手段将其离子化,然后通过分析器将具有特定质核比的肽段离子分离开来。通过实际谱图和理论上蛋白质经过蛋白酶---后产生的一级质谱峰图和二级质谱峰图进行的比对,进行蛋白鉴定。








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