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转录组测序

转录组即某个物种或特定细胞在某一功能状态下产生的rna的总和,是研究细胞表型和功能的一个重要手段。与基因组不同的是,pcr,转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下,其基因表达情况是不相同的。转录组测序(rna-seq)是指利用第二代高通量测序技术进行cdna测序,快速地获取某一物种特定qi官或组织在某一状态下的转录本。相对于传统芯片而言,rna-seq无需预先设计探针,即可对物种的细胞类型的转录组进行检测,pcr引物设计,能够提供较的数字化信号,更高的检测通量以及更广泛的检测范围,是目前深入研究转录组复杂性的---工具。







rna提取预备工作

rna酶(rnase)是导致rna降解主要的物质。此酶非常稳定,在一些的条件下只可暂时失活,但---因素去除后又迅速恢---性。常规高温高压灭菌方法和蛋白抑制ji不能使所有的rnase完全失活。

1.它广泛存在于人的皮肤上,因此制备rna时必须戴手套

2.rnase的又一污染源是取液器。根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用以depc配制的70%---擦洗取液器的内部和外部,可基本达到要求。

3. 塑料制品、玻璃和金属物品的处理

(1)塑料制品:尽量使用---无菌塑料制品。已标明rnase-free的塑料制品,如没有开封使用过,通常不必再处理。




高l效液相色谱法检验方法


高l效液相色谱法是一种现代液体色谱法,其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相,---,用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱,注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后,各成分先后进入检测器,用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理,pcr实验室,得到测定结果。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相,本法具有分离---,分析速度快的特点。


高l效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的---的分析测定,---是多组分---的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的---需要在色谱分离前或后经过衍生化反.应,方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有硅胶用于正相色谱;化学键合固定相,根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱,其中常用的是十八烷基硅l烷(又称ods)键合硅胶,可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料,用于离子交换色谱,是有一定孔径的大孔填料,用于排阻色谱。











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