细胞生物学-细胞-英瀚斯生物科技公司

大鼠gu髓间充质gan细胞的分离

操作方法

(1 )取sd大鼠( 2周龄)，颈椎脱臼法处死后立即用75%---浸泡，细胞生物学，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。

(2)碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨，剔除骨头表面肌肉， pbs溶液冲洗两遍。

(3 )从中间剪断股骨和胫骨，用2ml无菌注she器吸取dmem/f 12溶液冲出gu髓细胞多次，再用针头吹打，吸管吸入离心管内，1000r/min离心5min，弃上清，用pbs重悬细胞。

(4 )缓慢将细胞悬液加入预先装有5ml淋巴细胞分离液的15ml离心管内，保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层，注意不要搅动液面，保持二者分层界面。

(5 ) 2000rpm离心15-25min，离心后溶液分4层，吸取中间骨sui基质细胞层(白色浑浊状)， pbs洗三次。

(6)用含15%胎牛xue清及青链mei素的dmem/f 12以106/ml的细胞浓度接种于25cm2培养瓶中， 置37°c、5%co2恒温培养箱中培养。

( 7 ) 24小时后弃去培养液(看细胞贴壁情况)，pbs冲洗2-3次去除末贴壁细胞，加入培养液继续培养。以后每3d半量换液1次，-般10d细胞生长融合。

(8 )经0.25%胰酶---，1 : 2传代，转染，其后一般3-5d传代1次，选取生长---的第三代细胞进行后续实验。

关于细胞培养的常见问题

q：培养液到底要不要加双抗（青&链）？

a：双抗不是细胞生长必需的。我们培养细胞时不常规使用，癌细胞，因为连续使用会促进耐药性细胞株的产生，导致轻度污染持续存在。一旦将从培养液中去除，细胞，这种轻度污染终将发展成为---污染。具体情况，可根据自己实验室的环境，自行决定是否使用双抗。

q：细胞培养，能更换成其它种类的培养基吗？

a：我们---建议好使用细胞提供机构或细胞库的生长培养液。有些细胞可能会适应在不同培养基中生长，在做好保种的条件下，可以分出部分细胞做测试。