关于细胞培养的常见问题:
q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理？
a: 贴壁细胞在移除原培养液后，用 pbs 冲洗 2-3 遍；悬浮细胞离心移除原培养液后，加入 pbs 重悬，离心移除 pbs; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍，细胞实验外包，用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。
q：细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗？
a：长期保存的细胞应当放在液氮（-196℃）中保存，短时间（一般 1 周-2 周）可以存放在 -80℃。
q：培养瓶是用密封盖好，还是用透气盖好？
a：都可以。只是在使用密封盖培养瓶时，瓶盖旋至约 2/3，不要完全拧紧，预留约 1/3 以便细胞可以透气；有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。
q:何谓 fbs，fcs，cs，hs?
a: fetal bovine serum(fbs)和 fetal calf serum(fcs)之间没有区别，都是指胎牛；fcs 不是正规命名，尽量不使用。calf serum（cs）则是指小牛。horse serum(hs)则是指马。
cell counting kit-8（简称cck-8）是一种基于wst-8的广泛应用于---和细胞毒性的检测试剂。wst-8化学名：2-(2-甲氧ji-4-硝ji---ji)-3-(4-硝ji---ji)-5-(2，4-二磺酸---)-2h-四唑单钠盐，是一种类似于mtt的化合物，它在电子载体1-甲氧ji-5-甲ji吩---鎓---二jia酯（1-methoxy pms）存在的情况下，被线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物（formazan）。---越多越快，细胞实验，颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅，对于同样的细胞，颜色的深浅与活xi胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行---和毒性分析。
2、快速脂质体转染法操作步骤如下 [方法二]：
(1) 以 5×105 细胞/孔接种 6 孔板 (或 35 mm 培养皿) 培养 24 小时，使其达到 50～60% 板底面积。
(2) 在试管中配制 dna/脂质体复合物方法如下：
在 1 ml 无 dmem 中稀释 psv2-neo 质粒 dna 或供体 dna。
旋转 1 秒钟，再加入脂质体悬液，旋转。
室温下放置 5～10 分钟，使 dna 结合在脂质体上。
(3) 弃去细胞中的旧液，用 1 ml 无 dmem 洗细胞一次后弃去，向每孔中直接加入 1 ml dna/脂质体复合物，37℃ 培养 3～5 小时。
(4) 再于每孔中加入 20%fcs 的 dmem，继续培养 14～24 小时，
(5) 吸出 dmem/dna/脂质体混合物加入新鲜 10%fcs 的 dmem，细胞实验外包选，2 ml/孔，再培养 24～48 小时。
(6) 用细胞刮或---法收集细胞，以备分析鉴定。
3、稳定的脂质体转染方法如下：
(1) 接种细胞同前，细胞长至 50% 板底面积可用于转染。
(2)dna/脂质体复合物制备转染细胞同前 (2)、(3) 步骤。
(3) 在每孔中加入 1 ml、20%fcs 的 dmem，细胞实验外包，37℃ 培养 48 小时。
(4) 吸出 dmem，用 g418 选择培养液稀释细胞，使细胞生长一定时间，筛选转染，方法参照细胞筛选法进行。
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