4. 各种细胞对冻存速度的要求也不一样;上皮细胞和成纤维细胞耐受性可能大些,细胞周期,-2~-3℃/ 分钟合适;胚胎细胞耐受性较小,不宜太快。总之在一开始时,下降速度不能超过-10℃/ 分钟。
5. 用什么防护剂合适和用量多大,要依细胞而定,初代培养细胞用 dmso 较好,细胞生物学,一般细胞可用甘油;用量以较小为好。有人认为肤上皮细胞贮存在 20%-30% 甘油中---。
6. 原则上细胞在液氮中可贮存多年,但为妥善起见,冻存一年后,应再复苏培养一次,然后再继续冻存。
7. 将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免
8. 注意自身的安全,感受态细胞,对于来自人源性或---的细胞株应---小心。操作过程中,应避免引起气溶胶的产生,小心有毒性试剂例如 dmso,并避免尖锐物品---等。
大鼠脂肪的分离
将手术切取的大鼠脂肪组织尽量剪碎后移至离心管,其余步骤与人脂肪的分离一致。
经手术切除获得的大鼠皮下脂肪组织---后原代培养24 h,且肉眼观察会发现培养瓶底部贴附着一层网状薄膜,轻轻摇晃培养瓶可使这层网状薄膜从瓶壁上脱落,镜下观 察发现大部分细胞都附着于这层膜上,通过术获取的人脂肪组织---后则无此现象。增加胶原酶的量和---时间也无法避免,取材时的或脂肪间结缔组织未被完全---,穿过细胞筛进入了培养瓶并沉淀于瓶底部形成的。胶原蛋白酶虽然可以特---水解胶原蛋白的三维螺旋结构,但不会损伤其他蛋白质。处理方法是37 ℃下用胰蛋白酶 ---5 min。然后利用40 μm的细胞筛过滤后传代。 根据作者的经验,每毫升手术切除的大鼠脂肪可分离基质血管成分细胞约1.81×106个。原代培养2.24×10^7个大鼠基质血管成分细胞,40 h后传代时约剩余 6.2×10^6个细胞,细胞剩余率27%。
选择实验外包公司需要注意哪些事项?
报价
报价单一定要有明细。规范的外包公司会根据实验方案里的各项内容进行核算报价,材料是多少、人工检测是多少,可以看到每一笔钱花在哪里,避免笼统的报价。另外注意不要一味地追求,做过实验的都知道实验成本,外包还需要考虑人工成本。如果价格过低,细胞,实验数据就难以------和来源了。当然报价也不能虚高,做好是能在有限的经费中尽量---课题完整性。可以要求公司根据预算来调整优化方案,尽可能节约成本。
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