高架十字迷宫行为学检测：
实验原理
高架十字迷宫（the elevated plus maze，epm）是评价啮齿类动物焦躁反应的实验方法 ， 相较伤害性---所致小鼠焦躁行为检测（如电--- 、 噪声--- 、 饮食剥夺和暴露在捕食者气味等）， 该实验具有操作简单的优点 ， 能直观反映小鼠的条件应答 。 epm实验是在高架y型迷宫的基础上发展而来的 。 epm由开臂（open arms和闭臂（closed arms）各两条组成 ， 呈十字形交叉 ， 交义部分为中央区 ， 距地面有一定高度 。其原理是由于面对新事物开臂 小鼠会产生好奇心去探究 ，动物实验室， 而它们有嗜暗的天性（闭臂）， 两者之间发生探究与回避的冲突行为，产生焦躁心理。整个迷宫距离地面的高度相当于人类站在悬崖边，易导致动物产生恐惧不安的心理。可以通过对比小鼠在开臂和闭臂内的滞留时间和路程来评价小鼠的焦躁行为。
epm实验在---开发和研究中得到广泛的应用：主要用于---氮卓类---的抗焦躁作用研究 及筛选具有抗焦l虑作用的新药，也被用于研究精神性------的影响及激s素的功能，应激对生殖、衰老、妊s娠的影响等。抗焦l虑药主要选择性地抑制边缘系统 的海马、杏仁核 ，产生抗焦躁作用。
2.2旋转圆筒睡眠剥夺法
此方法于 1979 年先应用于睡眠剥夺实验中，设备主要由一柱形圆筒及一小型慢速马达构成。圆筒直径 30 cm，高 30 cm 。圆筒底由 pvc (聚)构成，侧壁由直径为 10.4 m m 的 pvc 杆围成。杆长度 30 cm，杆之间间隔 15.5 m m，圆筒与小型马达相连。马达转速为每 45 s转 1 圈(也有学者应用每 m in 转 1 圈)。至少在实验前 2 d每天将大鼠放入圆筒中适应环境 1 次，---前动物实验，适应时间不少于 3 h。实验时将马达按 45 s每1 圈进行匀速转动，通过圆筒的转动带动大鼠---运动而达到睡眠剥夺的目的。此类方法简单易行，睡眠剥夺效果明显。缺点是长时间---运动可引起机体的运动后应激反应及---劳，可能干扰睡眠剥夺实验结果! 此类方法发展出多种变化，有实验者在进行新生大鼠睡眠剥夺时将筒旋转速调节至 2~3 r/m in后期逐渐增加至 6~7 r/m in。
一、主要试剂材料
细胞自噬染色检测试剂盒(mdc法)（solarbio，g0170）
dmem（hyclone，sh30023）
fbs（hyclone，sh30070.03）
青链mei素（hyclone，sv30010）
胰酶（hyclone，sh30042.01）
pbs（南京生兴，sn331）
co2培养箱（thermo fisher，可以做动物实验的公司，3131）
confocal荧光显微镜（zeiss，lsm710）
二、实验方案
1、mg63及其耐药株培养在含10%胎牛xue清的dmem完全培养基中培养，培养在37℃含5%co2的细胞培养箱中培养，当---至80%-90%时，用胰酶将细胞---下来，按照1:3比例传代。
2、将1×106个细胞种在3.5cm玻璃底培养皿中，将细胞放入培养箱中培养过夜后，分别加入mir-22、cisp1atin、cisp1atin和mir-22后，铜川动物实验，将细胞放入培养箱中培养12h、24h。3、将细胞从培养箱中取出，去除培养基，用300～400μl的1×wash buffer清洗细胞1次，弃上清。4、加入适量mdc stain，轻轻混匀。5、室温避光染色15～45min。6、用300～400μl的1×wash buffer清洗细胞2次，弃上清。7、加入100μl的collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，拍照。
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