一、主要试剂材料
细胞自噬染色检测试剂盒(mdc法)(solarbio,g0170)
dmem(hyclone,sh30023)
fbs(hyclone,sh30070.03)
青链mei素(hyclone,sv30010)
胰酶(hyclone,实验动物,sh30042.01)
pbs(南京生兴,sn331)
co2培养箱(thermo fisher,3131)
confocal荧光显微镜(zeiss,lsm710)
二、实验方案
1、mg63及其耐药株培养在含10%胎牛xue清的dmem完全培养基中培养,培养在37℃含5%co2的细胞培养箱中培养,当---至80%-90%时,用胰酶将细胞---下来,按照1:3比例传代。
2、将1×106个细胞种在3.5cm玻璃底培养皿中,将细胞放入培养箱中培养过夜后,分别加入mir-22、cisp1atin、cisp1atin和mir-22后,将细胞放入培养箱中培养12h、24h。3、将细胞从培养箱中取出,去除培养基,用300~400μl的1×wash buffer清洗细胞1次,弃上清。4、加入适量mdc stain,轻轻混匀。5、室温避光染色15~45min。6、用300~400μl的1×wash buffer清洗细胞2次,弃上清。7、加入100μl的collection buffer重悬细胞,滴加于载玻片上并加盖玻片。8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm,阻断滤光片波长512nm),拍照。
大鼠炎模型造模方法
炎:
---炎主要由---如、衣原体等所引起,因的传播途径不同而产生不同的病理变化,形成黏膜炎、积脓、间质炎、周围炎和等。
慢性炎常为---炎未经及时或不,或---体质较差迁延日久所致;衣原体所致的炎可无---炎病史;性炎一般属于慢。
实验材料
sd大鼠
大肠悬液
方法步骤
1、大鼠禁食不禁水8h 。
2、戊钠(30mg/kg)腹腔,杭州动物实验,仰卧保定后,下腹部剃毛,碘酊消毒。
3、沿腹中线切口1cm左右,逐层暴露腹腔。
4、找到角,沿角找到双侧与。
5、在近处进针,向方向缓慢注射0.1ml菌液(两侧相同处理)。
6、使用血管钳夹住进针处与,防止菌液回流进。
7、逐层关闭腹腔,等待大鼠自然后常规饲养。
模型组大鼠肿胀,充血,积水,脓性分泌物,
与周围组织有不同程度的粘连。
大鼠切除模型构建
切除:
切除术是指切除全部或部分的手术:
性(全)切除术:医生会在性切除术中切除整个,通常还会切除连接和膀胱(输尿管)的部分管道等其他结构,或切除或淋等其他邻近结构。
部分切除术:医生会在部分切除术(也称为保(保留单位)手术)中切除病变组织,留下健康组织。
实验材料
sd大鼠
方法步骤
1、大鼠手术前禁食不禁水12小时。
2、使用戊钠(30mg/kg)腹腔,背侧剃毛固定于板上。
3、背部皮肤消毒。
4、在背侧找到区,使用手术刀开口,使用6号线结扎相连的血管后,切除一侧。
5、使用缝针依次缝合肌肉与皮肤,动物实验外包,碘酊消毒,动物实验室,注射防止。
6、待大鼠后,正常单笼饲养,防止大鼠互相撕咬伤口。
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