单细胞测序技术-细胞-南京英瀚斯生物科技

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    2024-3-21

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透射电镜自噬小体检测

胰酶---,收集作用后的细胞,离心,先将细胞块固定在2.5%成二醛和0.1%的pbs溶液中保存在4c中过夜。

再用---梯度脱水,接下来用环氧树脂浸透并切成薄片。随后超薄切片用铜网固定,后用重金属---双氧---和柠檬酸铅染色。通过tem分析凋亡细胞内超微结构变化,拍照保存。

贴壁细胞:先倒出培养液,采用胰蛋白酶---或者用细胞刮(会产生碎屑)刮下:带培养液进行离心,流式细胞检测,100-1500/mim 5 10min。离心完毕倒出培养液。管底的细胞团不要打散, 沿管壁倒入适量(一般为材料体积的5-10倍)的2.5-3.5%成醒固定液,固定约1h-2h. 也可在4c冰箱过夜。






自噬(autophagy)是细胞受到---后吞噬自身的细胞质或细胞器,终将吞食物在溶酶体内降解的过程,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白---物,损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、

---和---等。单丹---尸胺(dansylcadaverine,mdc是一种荧光色素,是嗜酸性染色剂,通常被于检测自噬体形成的特---标记染色剂,其检测激发滤光片波长355nm ,阻断滤光片波长512nm。leagene mdc染色液适用于培养细胞的自噬染色,可与eb合用双染。





关于细胞培养的常见问题:


q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理?

a: 贴壁细胞在移除原培养液后,用 pbs 冲洗 2-3 遍;悬浮细胞离心移除原培养液后,加入 pbs 重悬,离心移除 pbs; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍,用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。

q:细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗?

a:长期保存的细胞应当放在液氮(-196℃)中保存,短时间(一般 1 周-2 周)可以存放在 -80℃。

q:培养瓶是用密封盖好,还是用透气盖好?

a:都可以。只是在使用密封盖培养瓶时,转染,瓶盖旋至约 2/3,不要完全拧紧,细胞,预留约 1/3 以便细胞可以透气;有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。

q:何谓 fbs,fcs,cs,hs?

a: fetal bovine serum(fbs)和 fetal calf serum(fcs)之间没有区别,都是指胎牛;fcs 不是正规命名,尽量不使用。calf serum(cs)则是指小牛。horse serum(hs)则是指马。



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