英瀚斯-分子生物检测-南京分子生物检测

分子与质粒载体构建

实验原理

外源dna与载体分子的连接就是dna重组，这样重新组合的dna叫做重组体或重组子。重组的dna分子是在dna连接酶的作用下，有mg2+、atp存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源dna分子进行连接。dna连接酶有两种：t4噬菌体dna连接酶和大肠dna连接酶。两种dna连接酶都有将两个带有相同粘性末端的dna分子连在一起的功能，而且t4噬菌体dna连接酶还有—种大肠连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链dna分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接效率低，一般可通过提高t4噬菌体dna连接酶浓度或增加dna浓度来提高平末端的连接效率。

t4噬菌体dna连接酶催化dna连接反应分为3步：，t4dna连接酶与辅助因子atp形成酶—amp复合物；然后，酶—amp复合物再结合到具有5’磷酸基和3’---切口的dna上，使dna腺苷化；后产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。

dna重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法，分子生物学检测技术，为了防止载体本身的自连，可以通过(牛碱性磷酸酶)cip处理克服。

连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性.但是在这个温度下，粘性末端的氢键结合是不稳定的。因此人们找到了一个折中温度，即12-16℃，连接12-16h(过夜)，这样既可大限度地发挥连接酶的活性，又---到短暂配对结构的稳定。

分子生物学服务

 公司建有100平米分子实验室，配备有pcr仪、定量pcr仪、电泳仪、恒温培养箱、恒温摇床、垂直电泳仪、蛋白转印仪、蛋白发光成像仪等设备。分子组---毕业于农业大学、华中科技大学同济医学院、浙江理工大学等高校生物医学相关，全部具有硕士研究生以上---，熟练掌握分子生物学相关实验，可开展多种分子生物学检测服务。