南京逆转录pcr检测实验-英瀚斯

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    2020-11-25

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分子实验介绍——荧光检测

细胞荧光染色是以荧光物质标记而进行抗原定位的技术。在细胞中,通过特定的标记,可以检测目的蛋白表达量和表达定位。是细胞中的可直观观察细胞内蛋白定位和表达的实验方法。

实验流程:细胞固定-细胞膜破膜-蛋白封闭-目的蛋白结合-荧光二抗结合-dapi染色-荧光显微镜拍照或激光共---显微镜拍照。

结果示例:




细胞荧光染

通过观察细胞中蛋白的荧光强度和定位分析该蛋白的表达变化。







microrna芯片:

rna干扰(rna interference, rnai)现象是一种进化上保守的抵御---或外来---qin犯的防御机制。将含有靶基因mrna同源互补序列的rna(double strand rna, dsrna)导入细胞后,能够特异地识别该mrna,引起mrna的降解,从而导致相应的功能缺失。rnai提供了一种经济、快捷、gao效的抑制特异基因表达的技术手段,该技术已被广泛用于研究基因功能和chuan染性---及恶xingzhong瘤基因zhi疗领域。目前常用的rna干扰手段为mirna、 shrna和sirna等。

mirna是一类可以通过rnai机制调节基因表达的内源性小rna,人工mirna与shrna的设计原理基本相同,由于mirna具有内源性,因此其更易产生有效的基因沉默。

技术流程:

dsrna或pre-mirna被导入细胞后,能够被一种特异的---内切酶(dicer)识别并切割成为小片段,这些片段在rna解旋酶的作用下解链。继之反义链在与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成rna---的沉默复合物(rna-induced silencing complex,risc),risc与mrna同源区进行特---结合,若mirna与mrna的结合位点配对,则切割mrna;若mirna与mrna的结合位点不配对,则抑制mrna的翻译。






腺---包装原理介绍

腺---是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒,由252个 壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。衣壳里是线状双链dna分子,两端各有长约100bp的反向重复序列。人体腺--- 已知有33种,分别命名为ad1-ad33,研究详细得是ad2.

腺---是一种无包膜的球型结构的---,基因组dna提取公司,遗传物质为线型 双股dna形式。腺---的特点:(1)gan染范围广对人致病性低;(2)对增殖和非增殖细胞均具有gan染性;(3)能有效进行增殖;( 4)---滴度高;(5)不整合到染色体中,无插入致突变性;(6)外源基因装载容量大。由于腺---的这些特点使其广泛地应用于体 外基因转导、体内接种yi苗、和基因zhi疗等各个领域。

实验方法

1.获得目的基因序列;

2.构建---表达载体质粒;

3.表达载体质粒和包装质粒重组;

4.gan染hek293,包装出---;

5.---扩增、浓缩;

6.滴度测定。






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