细胞实验介绍——慢---建立稳转细胞系
慢---包装：公司使用3质粒慢---包装系统，慢---系统使用plko.1-egfp、pspax2、pmd2.g，过表达慢---系统使用plvx-acgfp、pspax2、pmd2.g三质粒系统，将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至hek293t细胞中，培养48h后，收集上清。使用genecopo公司慢---颗粒纯化试剂盒将慢---纯化。纯化后留取部分检测---滴度，其余---冻存于-80℃冰箱中。
滴度检测：将---颗粒使用梯度稀释，分别293t细胞，72h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算---滴度。
细胞：在---前---对细胞进行计数，接种约10000个细胞于12孔板中，培养过夜后使用无培养基稀释---，南京细胞，加入12孔板中对细胞进行，---数量根据细胞的moi加入（若无moi，需做---梯度：1，5，10，50，100 5个梯度对细胞），6h后去除含---溶液，加入完全培养基细胞培养，培养48h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光强度。同时加入puromycin对细胞筛选，筛选约2周时间。细胞筛选好后，使用定量pcr和western blot检测目的基因的稳定表达情况。
实验流程：慢---质粒构建-hek293t细胞培养-质粒转染293t细胞----收集----纯化----滴度检测-细胞-稳转细胞筛选-稳转细胞鉴定
结果示例：
图 a ---滴度检测；b 目的细胞---效果图
yao物对细胞的ic50检测
ic50 (half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮抗剂的半抑制浓度。它能指示某一yao物或者物质(yi制剂)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质，比如酶，细胞受体或是微生物)的半量。在凋亡方面，可以理解为一定浓度的某种药wu---肿liu细胞凋亡50%，该浓度称为50%抑制浓度，即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度，成纤维细胞分离培养，ic50值可以用来衡量yao物---凋亡的能力，即---能力越强，该数值越低，当然也可以反向说明某种细胞对yao物的耐受程度。
细胞检测服务
作为生物体结构和功能的基本单位，细胞在机体的各项---的生命活动中发挥着重要的作用，主动脉血管内皮细胞分离培养，与此同时，细胞的生理过程，细胞3d培养，在一定程度上也是机体生命活动的反应。因此利用多种精密仪器，结合特---的检测试剂，对体外培养的细胞直接检测其增殖的基本过程，或对细胞进行不同的处理后检测细胞生活周期内各项指标的变化，从而深入揭示细胞---的具体机制。
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