大鼠shen小球内皮细胞分离培养
2.原代细胞培养:(1)shen脏原位灌洗:sd大鼠用25%乌拉坦腹整注---zui后仰卧固定。胸腹部消森并分离胸主动脉，以无菌的冷hank液漱朱洗血.同时剪破shen静脉利于液体流出。1-2min后shen脏色泽变白，取出双shen冰浴保存。
(2)shen小球分离:参照green等方法改进。将灌洗后的shen脏撕下shen被膜.去除髓质后将皮质剪成约1-2mm的碎块，轻碾shen皮质依次通过80.120和200目钢筛。收集shen小球。
(3)shen小球---和培养；将提取的shen小球加人0.1% in 型胶原酶---后收集沉淀。以2x10* 的shen小球数接种于铺有1%明胶培养瓶内，加a配制好的内皮细胞培养液(mfm.hepes 20 mmnovl 20%胎牛xue清0. 66 u---/ml.血管内皮生长因子20 ng /ml、---钠100 u/ml.青莓su100 u/ml、链霉su100 μ/ml) .静止培养3 d后逐日观察shen小球的贴壁情况。待shen小球充分贴壁后常规换液.第3同进行纯化。
透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边.集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和调亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
结果评判:调亡细胞体积变小，细胞质浓缩。调亡i期( pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色---度盘绕，出现许多称为气穴现象( cavitati)的空泡结构; iia 期细胞核的染色---度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，293t细胞，产生调亡小体。
细胞检测服务
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