1、细胞准备:细胞传到后,pcr实验室,密度达到70%左右时进行转染;
2、细胞转染:取两个ep管,pcr,一个加入opti-mem、---质粒和包装质粒;另一个加入opti-mem、lipo2000,然后将两管混匀;
3、细胞孵育:将混合液逐滴加入细胞培养皿中,混匀后孵育;
4、收集---:转染后48h、72h收集含慢---的上清;
5、滴度检测:细胞为30%-50%时加入---上清液,检测阳性细胞比例。
str检测
短串联重复(short tandem repeats,pcr引物设计, str),又称微wei星dna(microsatellite dna)或简单重复序列(--- repeat sequence, srs或ssr),---多少钱,是广泛存在于原核生物和真核生物基因组中的核苷酸重复序列。有丝分裂过程中dna链之间的错配引起的fu制滑动被认为是导致str产生的较为常见原因,并且依据不同fu制单元大小的不同以及不同物种之间,fu制滑动发生的概率也不相同。
str是以---序列 (core repeat units) 首尾相连多次重复形成。每个str的---序列结构相同,长度为2-6bp,但其重复单位数目和重复区域的长度不同,因此str在不同种族、不同人群之间的分布具有差---,构成了str遗传多态性。不同个体之间在一个同源str位点的重复次数也不同,因而同指纹识别一样,str位点分析也可对个体进行身份识别。通过识别个体基因组在特定位点的特定序列重复,即可创建其基因档案。基于此,str分析法已经成为一种重要的鉴定分析方法,应用于---学、qin子鉴定及细胞鉴定等领域。
腺---包装原理介绍
腺---是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒,由252个 壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。衣壳里是线状双链dna分子,两端各有长约100bp的反向重复序列。人体腺--- 已知有33种,分别命名为ad1-ad33,研究详细得是ad2.
腺---是一种无包膜的球型结构的---,遗传物质为线型 双股dna形式。腺---的特点:(1)gan染范围广对人致病性低;(2)对增殖和非增殖细胞均具有gan染性;(3)能有效进行增殖;( 4)---滴度高;(5)不整合到染色体中,无插入致突变性;(6)外源基因装载容量大。由于腺---的这些特点使其广泛地应用于体 外基因转导、体内接种yi苗、和基因zhi疗等各个领域。
实验方法
1.获得目的基因序列;
2.构建---表达载体质粒;
3.表达载体质粒和包装质粒重组;
4.gan染hek293,包装出---;
5.---扩增、浓缩;
6.滴度测定。
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