细胞培养中常见的污染及解决方法
原生动物污染
原生动物污染后,细胞培养基变得轻微浑浊。在显微镜下,细胞实验,大量的小点来回移动。虽然此时细胞仍能生长,但繁殖速度减慢,细胞生长状态不好,边缘不清,细胞实验外包选,变得不透明。原生动物与细胞形成共生关系。同时,原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍,但以细胞为主,细胞实验外包费用,因为原生动物的数量相对较少,因而对细胞的正常生长没有影响,只有当它们达到一定数量时,才终---成为循环。
解决方法:原生动物污染的原因有很多,如液体消毒问题、操作问题、环境问题等,如果细胞足够,果断丢弃被污染的细胞和复苏细胞。如果要保留,需要购买使用相关的灭菌试剂。
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---是指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程,其结果是在空间上细胞产生差异,在时间上同一细胞与其从前的状态有所不同。---的本质是基因组在时间和空间上的选择性表达,通过不同基因表达的开启或关闭,终产生---蛋白质。细胞---是指将一群不同类型或者形态结构、功能特征存在差异的细胞通过生物学、物理学等手段,细胞实验外包,将之转变为具有相似/相同形态结构、功能特征的细胞群体的过程。
透射电镜自噬小体检测
胰酶---,收集作用后的细胞,离心,先将细胞块固定在2.5%成二醛和0.1%的pbs溶液中保存在4c中过夜。
再用---梯度脱水,接下来用环氧树脂浸透并切成薄片。随后超薄切片用铜网固定,后用重金属---双氧---和柠檬酸铅染色。通过tem分析凋亡细胞内超微结构变化,拍照保存。
贴壁细胞:先倒出培养液,采用胰蛋白酶---或者用细胞刮(会产生碎屑)刮下:带培养液进行离心,100-1500/mim 5 10min。离心完毕倒出培养液。管底的细胞团不要打散, 沿管壁倒入适量(一般为材料体积的5-10倍)的2.5-3.5%成醒固定液,固定约1h-2h. 也可在4c冰箱过夜。
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