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基因组甲l基化水平(methyl ati on content)的分析:

1.高l效液相色谱(hi gh-performanceli qui dchromatography， hplc)hplc是- -种比较传统的方法，是根据dna或蛋白分子量和构象的不同而使其加以分离。由于在动态相和静态相下分子的光吸收度并不相同而加以定量。随着系统的压强的增加，---多少钱，其分辨率增l高。故而能够定量测定基因组整体水平dna甲l基化水平。该方法由ruo等1980年首l次---。过程是将dna样品先经---或氢l氟酸水解成碱基，水解产物通过色谱柱，实时荧光定量pcr，结果与标准品比较，用紫外光测定吸收峰值及其量，计算5 mc/(5mc+5c)的积分面积就得到基因组整体的甲l基化水平。这是一种检测dna甲l基化水平的标准方法。

2.高l效毛细管电泳法(hi gh-per formance capillary electrophoresis， hpce)这是一-种利用窄孔熔融石英毛细管来从复合物中分离不同化学组分的技术。其基础是在强电场下不同分子的由于其所带电荷，大小，结构以及疏水性等不同而相互分开。用hipce方法处理dna水解产物来确定5mc水平，简便，经济且敏感性高。

活性氧检测试剂盒（reactive oxygen species assay kit）是一种利用荧光探针dcfh-da进行活性氧检测的试剂盒。dcfh-da本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成dcfh。而dcfh不能通透细胞膜，凉山pcr，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的dcfh生成有荧光的dcf。检测dcf的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂rosup以便于活性氧的检测。rosup是一种混合物（compound mixture），浓度为50mg/ml。

一、注意事项

1、探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

2、探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否---。

3、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（---时间除外），以减少各种可能的误差。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴---手套操作。

免yi共沉淀（co-ip检测）是以抗ti和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质与蛋白质间的相互作用也被保留下来。用预先固化在beads上的蛋白质a的抗ti免yi沉淀a蛋白，那么与a蛋白在体内结合的蛋白质b也能一起沉淀下来，---怎么做，再通过蛋白变性分离，对b蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。





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