细胞实验外包选-湖州细胞实验-英瀚斯

细胞实验介绍——慢---建立稳转细胞系

慢---包装：公司使用3质粒慢---包装系统，细胞实验外包选，慢---系统使用plko.1-egfp、pspax2、pmd2.g，过表达慢---系统使用plvx-acgfp、pspax2、pmd2.g三质粒系统，将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至hek293t细胞中，培养48h后，收集上清。使用genecopo公司慢---颗粒纯化试剂盒将慢---纯化。纯化后留取部分检测---滴度，其余---冻存于-80℃冰箱中。

滴度检测：将---颗粒使用梯度稀释，分别293t细胞，72h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算---滴度。

细胞：在---前---对细胞进行计数，接种约10000个细胞于12孔板中，培养过夜后使用无培养基稀释---，细胞实验外包，加入12孔板中对细胞进行，---数量根据细胞的moi加入（若无moi，需做---梯度：1，湖州细胞实验，5，10，50，100 5个梯度对细胞），6h后去除含---溶液，加入完全培养基细胞培养，培养48h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光强度。同时加入puromycin对细胞筛选，筛选约2周时间。细胞筛选好后，使用定量pcr和western blot检测目的基因的稳定表达情况。

实验流程：慢---质粒构建-hek293t细胞培养-质粒转染293t细胞----收集----纯化----滴度检测-细胞-稳转细胞筛选-稳转细胞鉴定

结果示例：

                                               图 a ---滴度检测；b 目的细胞---效果图

自噬(autophagy)是细胞受到---后吞噬自身的细胞质或细胞器，细胞实验外包费用，终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白---物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、

---和---等。单丹---尸胺(dansylcadaverine，mdc是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被于检测自噬体形成的特---标记染色剂，其检测激发滤光片波长355nm ，阻断滤光片波长512nm。leagene mdc染色液适用于培养细胞的自噬染色，可与eb合用双染。