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转录组重测序      

      转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有mrna的总和。转录组研究是基因功能及基因结构等研究的基础，通过新一代高通量测序，pcr，能够快速的获得某一物种特定组织或在某一状态下的几乎所有转录本序列信息，已广泛应用于---诊断、基础研究和研发等领域。

     转录组resequencing针对的是有参考基因组的物种。用新一代高通量测序技术对某物种的特定组织或细胞进行转录组测序，与参考基因组比较，可以得到基因表达差异、可变剪接、融合基因等遗传调控信息。

聚合酶链式反应(pcr)

操作步骤

1.在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

1qpcr buffer

5 μl

dntp mix( 2mm )

4 μl

引物1(10pm)

μl 2

引物2 ( 10pm)

2μl

taq酶(2u/ul)

1 μl

dna模板( 50ng-1μg/μl )

1 μl

加ddh2o至

μl 50

视pcr仪有无热盖，实时荧光定量pcr，不加或添加石蜡油。

2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置pcr仪上执行扩增。-般:在93°c

预变性3-5min ，进入循环扩增阶段: 93°c 40s***58°c 30s***72°c 60s ，广西pcr，循环30-35

次，后在72°c保温7min。

3.结束反应， pcr产物放置于4°c待电泳检测或-20°c长期保存。

4. pcr的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油，需用100ul进行抽提反应混合液，以

除去石蜡油;否则，直接取5- 10μl电泳检测。