阿坝细胞-流式细胞检测-英瀚斯(商家)

细胞实验介绍——慢---建立稳转细胞系

慢---包装：公司使用3质粒慢---包装系统，慢---系统使用plko.1-egfp、pspax2、pmd2.g，过表达慢---系统使用plvx-acgfp、pspax2、pmd2.g三质粒系统，将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至hek293t细胞中，培养48h后，收集上清。使用genecopo公司慢---颗粒纯化试剂盒将慢---纯化。纯化后留取部分检测---滴度，流式细胞检测，其余---冻存于-80℃冰箱中。

滴度检测：将---颗粒使用梯度稀释，分别293t细胞，72h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算---滴度。

细胞：在---前---对细胞进行计数，阿坝细胞，接种约10000个细胞于12孔板中，培养过夜后使用无培养基稀释---，加入12孔板中对细胞进行，---数量根据细胞的moi加入（若无moi，需做---梯度：1，5，10，50，100 5个梯度对细胞），6h后去除含---溶液，加入完全培养基细胞培养，培养48h后，细胞实验室，在荧光显微镜下观察细胞荧光强度。同时加入puromycin对细胞筛选，细胞迁移实验，筛选约2周时间。细胞筛选好后，使用定量pcr和western blot检测目的基因的稳定表达情况。

实验流程：慢---质粒构建-hek293t细胞培养-质粒转染293t细胞----收集----纯化----滴度检测-细胞-稳转细胞筛选-稳转细胞鉴定

结果示例：

                                               图 a ---滴度检测；b 目的细胞---效果图

选择实验外包公司需要注意哪些事项？

1. 实地考察

可以到公司实地考察一下实验室，看一下实验室环境、设备仪器情况，是否能满足实验方案所需条件。能整体承接课题，动物细胞。一些大型仪器公司不一定有，看有没有高校平台资源渠道共享。---是真实进行实验的，这样后续实验结果数据也比较---。

2. 方案评估

实验合作前期一般会进行所需实验内容的评估，来确定终实际实验方案和报价。方案评估可以看出外包团队的性。一个---的外包公司会对方案提出针对性的建议，评估各项实验是否能做，以及根据预算情况和实际操作对细节适当地调整。任何实验都是有不确定性的，但是前期敲定好方案能为后续实际开展实验打下---基础，也会省去许多---和麻烦。