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    2023-12-30

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自噬(autophagy)是细胞受到---后吞噬自身的细胞质或细胞器,终将吞食物在溶酶体内降解的过程,流式细胞实验,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白---物,损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、

---和---等。单丹---尸胺(dansylcadaverine,mdc是一种荧光色素,是嗜酸性染色剂,台州细胞,通常被于检测自噬体形成的特---标记染色剂,其检测激发滤光片波长355nm ,阻断滤光片波长512nm。leagene mdc染色液适用于培养细胞的自噬染色,可与eb合用双染。






磁性细胞标记方式

应用macs技术进行磁性细胞分选重要的一点是高的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记,并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式:直接标记和间接标记。

1、直接磁性细胞标记(direct ---ic cell labeling)

(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是快速、zui特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的macs直标微珠可供选用。

2、间接磁性细胞标记(indirect ---ic cell labeling )

(磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞)间接磁性细胞标记需要联合使用单ke隆或者多ke隆抗ti和macs间标微珠。未结合抗ti、生物素化抗ti或者荧光素标记抗ti均可作为一抗标记细胞,再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗,---,均可用于间接标记。间接标记主要在如下情况时选用:当没有直标磁珠时;需要用几种抗ti的混合物同时分选或去除多种类型的细胞;间接标记有放大作用,因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用;使用自备或者配体的磁珠分选中。( -般而言,阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大,阳性分离法用行更多。)







细胞实验介绍——细胞运动能力检测:

细胞划痕实验是体---拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,沿着中线使用移液器头或者其他硬物划1-3条平行的直线,细胞实验外包,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。

一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照

细胞迁移和侵袭实验是体---拟细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚---膜transwell小室放入培养板中,将细胞接种于小室中,利用培养液成分的差异---细胞运动,检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。

一般流程:transwell小室准备-细胞接种-细胞培养-transwell小室染色-显微镜拍照

结果示例:







                                       图 a 细胞划痕实验图;b,c 细胞迁移和侵袭实验图


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